24小时热门版块排行榜    

查看: 2163  |  回复: 19
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

向日21

新虫 (小有名气)

[求助] 要表达蛋白,构建重组质粒,好几次不成功 已有7人参与

要表达蛋白,构建重组质粒,我设计的酶切引物上只有酶切位点6个碱基,无论如何都连不上,是因为与质粒的同源壁太短么?我的片段长两千五百bp。我该怎么设计引物,同源壁要多长?

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘氏响声丸

铁虫 (小有名气)


向日21(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:26:02
可能像楼上说的引物设计有点问题
再者就是酶切没有切完全,质粒酶切没有完全
还有就是运气和经验了,,
祝好运

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2016-01-05 09:00:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

绿枫隽

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
向日21(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:25:04
你的片段不长,应该问题不大,可能原因有几个:第一,酶切位点前一般需要设置保护碱基,第二,你做酶切反应时,没有切开,第三,连接效率不高,第四,你的切好的载体有问题,第五,酶切时时间太长,片段切碎了。供参考

发自小木虫IOS客户端
2楼2015-12-06 10:22:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

向日21

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 绿枫隽 at 2015-12-06 10:22:19
你的片段不长,应该问题不大,可能原因有几个:第一,酶切位点前一般需要设置保护碱基,第二,你做酶切反应时,没有切开,第三,连接效率不高,第四,你的切好的载体有问题,第五,酶切时时间太长,片段切碎了。供参 ...

我还想再问一下,质粒的浓度要达到多少连接效率会好一点,我之前做的只有10ng/ul

发自小木虫IOS客户端
3楼2015-12-06 10:39:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2016-01-05 19:25:20
我也是,切好了载体和片段,连了两次都连不上,不知道问题出在哪里
想做个有趣的人,却在逗比的道路上越走越远~
4楼2016-01-04 22:41:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0857调剂 +4 一ll半 2026-02-28 5/250 2026-03-02 02:33 by 908055542
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[考研] 材料复试调剂 +3 学材料的点 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:07 by ccp273206157
[考研] 材料学硕318求调剂 +11 February_Feb 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:53 by ccp273206157
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分,求调剂 +5 wsl111 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:45 by 暮雨星晴
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:32 by L135790
[考研] 0854复试调剂 276 +3 wmm9 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:13 by 热情沙漠
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +3 weizhong123 2026-03-01 3/150 2026-03-01 21:42 by 公瑾逍遥
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 6/300 2026-03-01 21:24 by cgyzqwn
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 材料284求调剂,一志愿郑州大学英一数二专硕 +10 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:12 by yc258
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
信息提示
请填处理意见