24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2227  |  回复: 19
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

向日21

新虫 (小有名气)

[求助] 要表达蛋白,构建重组质粒,好几次不成功 已有7人参与

要表达蛋白,构建重组质粒,我设计的酶切引物上只有酶切位点6个碱基,无论如何都连不上,是因为与质粒的同源壁太短么?我的片段长两千五百bp。我该怎么设计引物,同源壁要多长?

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘氏响声丸

铁虫 (小有名气)


向日21(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:26:02
可能像楼上说的引物设计有点问题
再者就是酶切没有切完全,质粒酶切没有完全
还有就是运气和经验了,,
祝好运

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2016-01-05 09:00:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

绿枫隽

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
向日21(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:25:04
你的片段不长,应该问题不大,可能原因有几个:第一,酶切位点前一般需要设置保护碱基,第二,你做酶切反应时,没有切开,第三,连接效率不高,第四,你的切好的载体有问题,第五,酶切时时间太长,片段切碎了。供参考

发自小木虫IOS客户端
2楼2015-12-06 10:22:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

向日21

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 绿枫隽 at 2015-12-06 10:22:19
你的片段不长,应该问题不大,可能原因有几个:第一,酶切位点前一般需要设置保护碱基,第二,你做酶切反应时,没有切开,第三,连接效率不高,第四,你的切好的载体有问题,第五,酶切时时间太长,片段切碎了。供参 ...

我还想再问一下,质粒的浓度要达到多少连接效率会好一点,我之前做的只有10ng/ul

发自小木虫IOS客户端
3楼2015-12-06 10:39:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2016-01-05 19:25:20
我也是,切好了载体和片段,连了两次都连不上,不知道问题出在哪里
想做个有趣的人,却在逗比的道路上越走越远~
4楼2016-01-04 22:41:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 290求调剂 +5 柯淮然 2026-04-12 7/350 2026-04-12 05:04 by labixiaoqiao
[考研] 0854调剂 +8 长弓傲 2026-04-11 9/450 2026-04-11 21:44 by 蓝云思雨
[考研] 广东省 085601 329分求调剂 +14 Eddieddd 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:58 by bljnqdcc
[考研] 求调剂 +13 雪逢冬 2026-04-10 13/650 2026-04-11 09:58 by 猪会飞
[考研] 22408调剂求助 +7 毂12 2026-04-09 9/450 2026-04-11 09:23 by 哦哦123
[考研] 080500求调剂 +17 黄宇博 2026-04-06 17/850 2026-04-11 08:36 by zhq0425
[考研] 化学工程与技术324调剂 +23 孙常华 2026-04-09 25/1250 2026-04-11 00:07 by 骑牛渡寒江
[考研] 材料085601调剂 +25 何润采123 2026-04-10 27/1350 2026-04-10 23:17 by Ftglcn90
[考研] 已调剂 +18 柴郡猫_ 2026-04-09 19/950 2026-04-09 22:10 by 柴郡猫_
[考研] 一志愿华工085600 331分 +6 天下ww 2026-04-09 6/300 2026-04-09 18:59 by l_paradox
[考研] 368化学求调剂 +13 wwwwabcde 2026-04-07 14/700 2026-04-09 14:47 by heaven_jay
[考研] 086000生物与医药调剂 +7 awwwwwooooo 2026-04-09 7/350 2026-04-09 13:31 by 北极159263
[考研] 一志愿0807 数一英一 313 有没有二轮调剂 +11 emokidd 2026-04-08 12/600 2026-04-09 09:24 by wyf236
[考研] 285求调剂 +12 AZMK 2026-04-05 18/900 2026-04-08 20:43 by 逆水乘风
[考研] 材料科学与工程320求调剂,080500 +12 黄瓜味薯片 2026-04-06 12/600 2026-04-08 16:26 by luoyongfeng
[考研] 265求调剂 +19 小木虫085600 2026-04-06 21/1050 2026-04-08 10:38 by 逆水乘风
[考研] 263分B区求调剂 +6 李nihao 2026-04-08 6/300 2026-04-08 09:38 by 南开小綦
[考研] 计算机11408 287 求调剂 +3 LiLe5 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:15 by shanqishi
[考研] 344求调剂 +11 魏子per 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:01 by JourneyLucky
[考研] 专硕085403,291分,有两篇专利,一国一奖 +3 哈吉咪哈吉咪 2026-04-07 3/150 2026-04-07 18:21 by 蓝云思雨
信息提示
请填处理意见