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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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笔笔小结

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒不表达 已有3人参与

表达载体是pET28a,在-20冰箱放了两年,拿出来做表达,SDS-PAGE没有目的条带出来。两年前表达量挺高的,这是什么原因呢,按理说质粒放-20两年应该没问题的
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永恒_99

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-03-24 07:32:22
连接目的基因的载体需要保存在DH5a中,需要提出质粒重新转化进BL21中。
2楼2016-03-22 16:18:17
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笔笔小结

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 永恒_99 at 2016-03-22 16:18:17
连接目的基因的载体需要保存在DH5a中,需要提出质粒重新转化进BL21中。

DH5a感受态细胞不是用于质粒扩增的吗?你的意思是重组质粒先转化DH5a,提质粒后再转化BL21DE3中?可是这样做的原因是?请指教
3楼2016-03-23 20:42:59
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haijun海军11

新虫 (小有名气)

可能是中间某步操作有问题吧,一般这种问题再重复一次试试,载体-20应该不会有问题

发自小木虫Android客户端
大家一起加油
4楼2016-03-24 00:04:31
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
将两年前的质粒重新转化DH5a提一次,然后转化BL21再行诱导表达
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2016-03-24 01:59:41
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你提出质粒,做过PCR,看看条等,在吧这个质粒重组到BL21(DE3).
采菊东篱下,悠然见南山。
6楼2016-03-24 14:19:17
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笔笔小结

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by gyesang at 2016-03-24 01:59:41
将两年前的质粒重新转化DH5a提一次,然后转化BL21再行诱导表达

谢谢
7楼2016-03-28 20:17:25
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RCEESTHZ

铁虫 (初入文坛)

老师您好,我的质粒是puc19-EGFP,我发现转后的大肠杆菌在固体培养基中传几代后,EGFP就不表达了,非得等稳定期又开始表达了
8楼2024-07-10 13:29:08
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