SDS-PAGE拖尾严重,求分析原因
最近跑SDS-PAGE经常拖尾,降低了上样量也拖尾。实在找不出原因了,希望有大神帮忙分析一下问题!!!跪谢!!!
所有条件:
50V 浓缩胶 80V分离胶,电流在10-15 mA,跑两个半小时。(应该可以排除电流过大导致胶融化的因素)
8%分离胶,分离胶凝了4小时左右。(应该可以排除胶凝的不好的因素)
上样量:左边四个泳道上样50 ug,右边四个泳道上样25 ug,上样体积小于20 ul 。(应该可以排除上样量过大的因素)
样本:大鼠肾脏组织,提蛋白的过程中加了PMSF。(应该可以排除蛋白降解的因素)

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京公网安备 11010802022153号
1可能是胶没做好,2可能是核酸污染
可能是缓冲液不行了,一般缓冲液跑三次胶就要换掉;但可能也与电压有关系,一般120V,60 min左右
有PMSF也不能完全排除蛋白酶降解,MARKER呢?MARKER有同样问题的话GEL就有问题了
宝,推荐你一个网站,英格恩生物技术博客,上面有很多基础实验,你这个问题我之前看到过,你可以去搜一下。https://www.engreen.cn/
你好 那一般情况下 电流是多少比较好
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