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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE拖尾严重，求分析原因
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tyz2018

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE拖尾严重，求分析原因 已有5人参与

最近跑SDS-PAGE经常拖尾，降低了上样量也拖尾。实在找不出原因了，希望有大神帮忙分析一下问题！！！跪谢！！！
所有条件：
50V 浓缩胶  80V分离胶，电流在10-15 mA，跑两个半小时。（应该可以排除电流过大导致胶融化的因素）
8%分离胶，分离胶凝了4小时左右。（应该可以排除胶凝的不好的因素）
上样量：左边四个泳道上样50 ug，右边四个泳道上样25 ug，上样体积小于20 ul 。（应该可以排除上样量过大的因素）
样本：大鼠肾脏组织，提蛋白的过程中加了PMSF。（应该可以排除蛋白降解的因素）

SDS-PAGE拖尾严重，求分析原因
IMG_20201028_091723.jpg
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天雨流芳
1楼 2020-10-28 10:52:51
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

tjj451679479

新虫 (小有名气)
没有把沉淀加进去吧？如果不是请自动忽略。
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6楼2020-10-29 12:40:02
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普通回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
可能是DNA引起样品粘稠的结果
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tyz2018 tyz2018
2楼2020-10-28 14:22:19
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tyz2018

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2020-10-28 14:22:19
可能是DNA引起样品粘稠的结果

但是提取出来的蛋白并不粘稠欸
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天雨流芳
3楼2020-10-28 15:04:39
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tyz2018

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2020-10-28 14:22:19
可能是DNA引起样品粘稠的结果

但是提取出来的蛋白并不粘稠欸
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天雨流芳
4楼2020-10-28 15:05:02
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tyz2018

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2020-10-28 14:22:19
可能是DNA引起样品粘稠的结果

但是提取出来的蛋白并不粘稠欸
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天雨流芳
5楼2020-10-28 15:05:11
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苏氨酸

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
marker咋样？是不是样本盐浓度太高
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7楼2020-10-29 14:40:35
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正清哲和

至尊木虫 (职业作家)
连成丝状，感觉是缓冲液不新鲜了，电泳了多次，或长微生物了，导致缓冲液粘稠，电极气泡丝状冒起来，不能及时消散
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对他人，可以善待、珍重，但无需寄以厚望，依旧充满感激 ，做好自己！
8楼2020-11-02 20:11:44
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030Selma

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1可能是胶没做好，2可能是核酸污染
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9楼2020-11-03 17:00:11
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sunny0810

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可能是缓冲液不行了，一般缓冲液跑三次胶就要换掉；但可能也与电压有关系，一般120V，60 min左右
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10楼2020-11-03 21:49:51
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