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tyz2018

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE拖尾严重,求分析原因 已有5人参与

最近跑SDS-PAGE经常拖尾,降低了上样量也拖尾。实在找不出原因了,希望有大神帮忙分析一下问题!!!跪谢!!!
所有条件:
50V 浓缩胶  80V分离胶,电流在10-15 mA,跑两个半小时。(应该可以排除电流过大导致胶融化的因素)
8%分离胶,分离胶凝了4小时左右。(应该可以排除胶凝的不好的因素)
上样量:左边四个泳道上样50 ug,右边四个泳道上样25 ug,上样体积小于20 ul 。(应该可以排除上样量过大的因素)
样本:大鼠肾脏组织,提蛋白的过程中加了PMSF。(应该可以排除蛋白降解的因素)

SDS-PAGE拖尾严重,求分析原因
IMG_20201028_091723.jpg
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天雨流芳
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tjj451679479

新虫 (小有名气)

没有把沉淀加进去吧?如果不是请自动忽略。
6楼2020-10-29 12:40:02
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普通回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

可能是DNA引起样品粘稠的结果

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2020-10-28 14:22:19
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tyz2018

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2020-10-28 14:22:19
可能是DNA引起样品粘稠的结果

但是提取出来的蛋白并不粘稠欸
天雨流芳
3楼2020-10-28 15:04:39
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tyz2018

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2020-10-28 14:22:19
可能是DNA引起样品粘稠的结果

但是提取出来的蛋白并不粘稠欸
天雨流芳
4楼2020-10-28 15:05:02
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tyz2018

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2020-10-28 14:22:19
可能是DNA引起样品粘稠的结果

但是提取出来的蛋白并不粘稠欸
天雨流芳
5楼2020-10-28 15:05:11
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苏氨酸

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
marker咋样?是不是样本盐浓度太高
7楼2020-10-29 14:40:35
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正清哲和

至尊木虫 (职业作家)

连成丝状,感觉是缓冲液不新鲜了,电泳了多次,或长微生物了,导致缓冲液粘稠,电极气泡丝状冒起来,不能及时消散
对他人,可以善待、珍重,但无需寄以厚望,依旧充满感激 ,做好自己!
8楼2020-11-02 20:11:44
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030Selma

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1可能是胶没做好,2可能是核酸污染
9楼2020-11-03 17:00:11
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sunny0810

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可能是缓冲液不行了,一般缓冲液跑三次胶就要换掉;但可能也与电压有关系,一般120V,60 min左右
10楼2020-11-03 21:49:51
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