通过Gibson组装，你如果想两个基因共用一个启动子，第二个基因ATG和前一个基因TAA之间记得加上RBS；如果各自带启动子，扩增出载体，基因1和启动子，基因2和启动子后三个片段组装。

引用回帖:

5楼: Originally posted by yuzhongbaihe at 2020-07-11 22:19:09
我们是想把2个杀虫蛋白构建到自己改造的一个载体上，所以第2种方法肯定不能用了，第一种方法我还是不太理解呢，我这两个基因都是3000多bp的，肯定不能全部都克隆上去？能给再说的具体些吗？
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（1）想把两个蛋白同时表达在一起（表达成一个融合蛋白），这个可以加linker可以实现
（2）如果两个蛋白表达出来，在第一个蛋白TAA结尾，第二个蛋白ATG开头，原来是TAA ATG， 可以缩为 TAA TG，这样ribosome在中止第一个阅读框后，马上遇到起始子ATG，继续进行翻译
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我之前用duet系列质粒表达了5个基因，分别插入不同的MSC中，比串联表达好多了

我们是用之前实验室从pet21b改造过的质粒来做，实验室也没有做的，所以有点不知道该从哪个方面下手