应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 如何把两个基因克隆在一个载体上
131/2返回列表12下一页
查看: 3224  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 yuzhongbaihe 的 50 个金币

yuzhongbaihe

新虫 (正式写手)

[交流] 如何把两个基因克隆在一个载体上

有做过双基因共载体的大神们吗？想请教一下具体细节如何把两个基因整合到一个载体上

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2020-07-11 17:58:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

pennchem

专家顾问 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
（1）嵌合，两个在同一个启动子和终止子中间，第一个基因以TAA结束，而第二个基因以ATG开始，所以嵌合处序列为 TAA（TG）

（2）用pDuet质粒，有两个MCS，各插入一个基因
赞一下(2人) 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
2楼2020-07-11 20:53:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haoziying

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
提前分析两个目的基因的酶切位点，选择mcs的靠前位置的位点连接，也可以在设计两段目的基因的引物时加入酶切位点（该酶不切目的基因），通过两次克隆连接。串联表达。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2020-07-12 05:50:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

forhighbio

捐助贵宾 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
两个3000多的蛋白，要选好载体，

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2020-07-12 12:22:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨独步

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
通过Gibson组装，你如果想两个基因共用一个启动子，第二个基因ATG和前一个基因TAA之间记得加上RBS；如果各自带启动子，扩增出载体，基因1和启动子，基因2和启动子后三个片段组装。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2020-07-12 13:05:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by yuzhongbaihe at 2020-07-11 22:19:09
我们是想把2个杀虫蛋白构建到自己改造的一个载体上，所以第2种方法肯定不能用了，第一种方法我还是不太理解呢，我这两个基因都是3000多bp的，肯定不能全部都克隆上去？能给再说的具体些吗？
...

（1）想把两个蛋白同时表达在一起（表达成一个融合蛋白），这个可以加linker可以实现
（2）如果两个蛋白表达出来，在第一个蛋白TAA结尾，第二个蛋白ATG开头，原来是TAA ATG， 可以缩为 TAA TG，这样ribosome在中止第一个阅读框后，马上遇到起始子ATG，继续进行翻译。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yuzhongbaihe
行至水穷处，坐看云起时
10楼2020-07-13 08:14:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

匿名

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖仅楼主可见
赞一下
3楼2020-07-11 20:58:33
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

pennchem

专家顾问 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
分别表达自己的，不会互相干扰

蛋白相互作用，那是表达折叠之后的事情了
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
4楼2020-07-11 21:04:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuzhongbaihe

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2020-07-11 20:53:45
（1）嵌合，两个在同一个启动子和终止子中间，第一个基因以TAA结束，而第二个基因以ATG开始，所以嵌合处序列为 TAA（TG）

（2）用pDuet质粒，有两个MCS，各插入一个基因

我们是想把2个杀虫蛋白构建到自己改造的一个载体上，所以第2种方法肯定不能用了，第一种方法我还是不太理解呢，我这两个基因都是3000多bp的，肯定不能全部都克隆上去？能给再说的具体些吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2020-07-11 22:19:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tjw0824

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
串联表达呗，加linker

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
tttt
8楼2020-07-12 12:51:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yuzhongbaihe 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +16 低垂的野花 2026-07-31 22/1100 2026-08-01 16:39 by Cathyau
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 9/450 2026-08-01 15:50 by y4XuShGyllvT
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 6/300 2026-08-01 15:46 by y4XuShGyllvT
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 11/550 2026-08-01 15:43 by y4XuShGyllvT
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 8/400 2026-08-01 15:42 by y4XuShGyllvT
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 11/550 2026-08-01 15:40 by y4XuShGyllvT
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +15 布布和一二 2026-07-30 19/950 2026-08-01 15:18 by 40862026
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +14 wangze12014 2026-07-28 18/900 2026-07-31 18:35 by lzchaihuo
[教师之家] 基础研究怎么拉横向，学校到款任务越来越多，难以完成 拉横向，都有哪些途径啊 +8 锦衣卫寒战 2026-07-28 8/400 2026-07-31 18:13 by beefly
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 系统今天又提示维护了，估计离放榜不远了 +11 winnerche 2026-07-29 15/750 2026-07-30 23:08 by jnhyjjm
[考博] 申请2027年材料/化学类博士 10+3 考研老狗? 2026-07-25 5/250 2026-07-30 19:33 by 白色木鱼
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
[基金申请] 今年的WR进展到哪一步了？ +5 wsgjhwz 2026-07-25 9/450 2026-07-30 12:59 by 可淡不可忘
[基金申请] 时间戳他又来了 +14 晓晓爱翠翠 2026-07-26 17/850 2026-07-29 16:30 by 呵呵二哥
[有机交流] 这个自发加氧反应的机理是什么？ 50+4 YUAN2273 2026-07-25 7/350 2026-07-29 12:27 by xiaobenpu
[基金申请] 这种情况还有戏吗 +5 drbart 2026-07-27 11/550 2026-07-29 05:50 by drbart
[基金申请] 同事接到电话了，我却没有 +4 1234567wang 2026-07-27 4/200 2026-07-28 10:11 by GOODLUCKER
[基金申请] 准备明年的基金了 +5 Tide man 2026-07-27 5/250 2026-07-28 09:25 by newfuzzy1
[分析] 水蒸气蒸馏法乳化现象 +3 月光娇娇 2026-07-26 3/150 2026-07-26 23:25 by caiyun
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭