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yuzhongbaihe

新虫 (正式写手)

[交流] 如何把两个基因克隆在一个载体上

有做过双基因共载体的大神们吗?想请教一下具体细节如何把两个基因整合到一个载体上

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pennchem

专家顾问 (正式写手)


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引用回帖:
5楼: Originally posted by yuzhongbaihe at 2020-07-11 22:19:09
我们是想把2个杀虫蛋白构建到自己改造的一个载体上,所以第2种方法肯定不能用了,第一种方法我还是不太理解呢,我这两个基因都是3000多bp的,肯定不能全部都克隆上去?能给再说的具体些吗?
...

(1)想把两个蛋白同时表达在一起(表达成一个融合蛋白),这个可以加linker可以实现
(2)如果两个蛋白表达出来,在第一个蛋白TAA结尾,第二个蛋白ATG开头,原来是TAA ATG, 可以缩为 TAA TG,这样ribosome在中止第一个阅读框后,马上遇到起始子ATG,继续进行翻译。

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行至水穷处,坐看云起时
10楼2020-07-13 08:14:27
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pennchem

专家顾问 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
(1)嵌合,两个在同一个启动子和终止子中间,第一个基因以TAA结束,而第二个基因以ATG开始,所以嵌合处序列为 TAA(TG)

(2)用pDuet质粒,有两个MCS,各插入一个基因
行至水穷处,坐看云起时
2楼2020-07-11 20:53:45
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匿名


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖仅楼主可见
3楼2020-07-11 20:58:33
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pennchem

专家顾问 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
分别表达自己的,不会互相干扰

蛋白相互作用,那是表达折叠之后的事情了
行至水穷处,坐看云起时
4楼2020-07-11 21:04:50
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