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LIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability Kits测定E.coli浓度

作者 XXH_QB
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如题,实验需要用LIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability Kits测定E.coli浓度,文献上说的是先染色,再The stained bacteria were imaged with an epifluorescence microscope (Olympus) with a U-filter (364 nm) for imaging cells stained with both PI and DAPI and an IB filter (464 nm) for detecting cells stained with only PI。
请问染色后,定量部分具体如何操作,需要什么仪器呢? 返回小木虫查看更多

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  • 精华评论
  • mizhoulong

    使细菌尽量均匀分布于黑色膜上,黑色膜一般使用25mm的好像,

    显微镜下的视野面积可以从物镜的型号得知,

    数显微镜视野下的菌数,变化视野,再数,至少数10个视野以上,取平均值,

    然后通过一个系数换算出膜上的细菌数。

    这样数有一定的风险,就是细菌在膜上分布不均匀,尽量数很多视野,视野遍布黑色膜的各个部分。

    这种方法在很多文献上可以查到。

  • mizhoulong

    几年前做过,等我回国后还要做这个实验

  • XXH_QB

    引用回帖:
    2楼: Originally posted by mizhoulong at 2013-02-25 08:53:10
    使细菌尽量均匀分布于黑色膜上,黑色膜一般使用25mm的好像,

    显微镜下的视野面积可以从物镜的型号得知,

    数显微镜视野下的菌数,变化视野,再数,至少数10个视野以上,取平均值,

    然后通过一个系数换算出膜 ...

    回答我的还是前辈啊感动~~
    我需要测试两种情况下的大肠杆菌浓度:1、溶液里的E.coli浓度;2、薄膜上截留的E.coli浓度
    今天上午咨询了试剂公司技术部门,他们说染色后能用荧光显微镜下照相并计数,两种情况都行(文献是这么做的,具体详细的没提到);可是打电话给学院负责荧光显微镜的老师,他却说只能用透光的玻片来做。
        前辈说的黑色膜透光吗?哪里可以买到呢

  • XXH_QB

    引用回帖:
    3楼: Originally posted by mizhoulong at 2013-02-25 08:53:58
    几年前做过,等我回国后还要做这个实验

    找到说明书了,慢慢啃

  • mizhoulong

    black membrane is not transparent, it can be acquired from Whatman or Millipore.

    maybe my fluorescence microscope is different from yours.

    there are some Chinese articles about this method.

  • tina2013liti

    引用回帖:
    2楼: Originally posted by mizhoulong at 2013-02-25 08:53:10
    使细菌尽量均匀分布于黑色膜上,黑色膜一般使用25mm的好像,

    显微镜下的视野面积可以从物镜的型号得知,

    数显微镜视野下的菌数,变化视野,再数,至少数10个视野以上,取平均值,

    然后通过一个系数换算出膜 ...

    请问,我想做活性炭上面的微生物量,混合种群的,用DAPI染色好呢,还是LIVE/DEAD好,哪个经济些

  • XXH_QB

    引用回帖:
    7楼: Originally posted by tina2013liti at 2013-12-08 11:50:56
    请问,我想做活性炭上面的微生物量,混合种群的,用DAPI染色好呢,还是LIVE/DEAD好,哪个经济些...

    LIVE/DEAD包括PI 和DAPI

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