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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » LIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability Kits测定E.coli浓度
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XXH_QB

木虫 (正式写手)

[交流] LIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability Kits测定E.coli浓度 已有9人参与

如题，实验需要用LIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability Kits测定E.coli浓度，文献上说的是先染色，再The stained bacteria were imaged with an epifluorescence microscope (Olympus) with a U-filter (364 nm) for imaging cells stained with both PI and DAPI and an IB filter (464 nm) for detecting cells stained with only PI。
请问染色后，定量部分具体如何操作，需要什么仪器呢？
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1楼 2013-02-23 16:46:57
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学
★ ★ ★ ★ ★ ★
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zhangxingc: 金币+5, 鼓励有价值回帖，奖励一下 2013-02-25 09:09:48
使细菌尽量均匀分布于黑色膜上，黑色膜一般使用25mm的好像，

显微镜下的视野面积可以从物镜的型号得知，

数显微镜视野下的菌数，变化视野，再数，至少数10个视野以上，取平均值，

然后通过一个系数换算出膜上的细菌数。

这样数有一定的风险，就是细菌在膜上分布不均匀，尽量数很多视野，视野遍布黑色膜的各个部分。

这种方法在很多文献上可以查到。
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环境卫生、微生物学、卫生应急
2楼2013-02-25 08:53:10
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tina2013liti

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用荧光显微镜拍照，数数目，或者用软件计算荧光面积，也能得到细菌数量
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10楼2013-12-10 13:52:06
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学
几年前做过，等我回国后还要做这个实验
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环境卫生、微生物学、卫生应急
3楼2013-02-25 08:53:58
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XXH_QB

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mizhoulong at 2013-02-25 08:53:10
使细菌尽量均匀分布于黑色膜上，黑色膜一般使用25mm的好像，

显微镜下的视野面积可以从物镜的型号得知，

数显微镜视野下的菌数，变化视野，再数，至少数10个视野以上，取平均值，

然后通过一个系数换算出膜 ...

回答我的还是前辈啊感动~~
我需要测试两种情况下的大肠杆菌浓度：1、溶液里的E.coli浓度；2、薄膜上截留的E.coli浓度
今天上午咨询了试剂公司技术部门，他们说染色后能用荧光显微镜下照相并计数，两种情况都行（文献是这么做的，具体详细的没提到）；可是打电话给学院负责荧光显微镜的老师，他却说只能用透光的玻片来做。
    前辈说的黑色膜透光吗？哪里可以买到呢？
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4楼2013-02-25 12:13:00
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XXH_QB

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mizhoulong at 2013-02-25 08:53:58
几年前做过，等我回国后还要做这个实验

找到说明书了，慢慢啃
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5楼2013-02-25 13:24:13
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
black membrane is not transparent, it can be acquired from Whatman or Millipore.

maybe my fluorescence microscope is different from yours.

there are some Chinese articles about this method.
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环境卫生、微生物学、卫生应急
6楼2013-02-26 00:19:45
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tina2013liti

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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2楼: Originally posted by mizhoulong at 2013-02-25 08:53:10
使细菌尽量均匀分布于黑色膜上，黑色膜一般使用25mm的好像，

显微镜下的视野面积可以从物镜的型号得知，

数显微镜视野下的菌数，变化视野，再数，至少数10个视野以上，取平均值，

然后通过一个系数换算出膜 ...

请问，我想做活性炭上面的微生物量，混合种群的，用DAPI染色好呢，还是LIVE/DEAD好，哪个经济些
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7楼2013-12-08 11:50:56
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XXH_QB

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by tina2013liti at 2013-12-08 11:50:56
请问，我想做活性炭上面的微生物量，混合种群的，用DAPI染色好呢，还是LIVE/DEAD好，哪个经济些...

LIVE/DEAD包括PI 和DAPI
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8楼2013-12-08 15:28:33
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学
★
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7楼: Originally posted by tina2013liti at 2013-12-08 11:50:56
请问，我想做活性炭上面的微生物量，混合种群的，用DAPI染色好呢，还是LIVE/DEAD好，哪个经济些...

效果是LIVE/DEAD好，DAPI染色肯定经济，DAPI染色我试过几次，可能因为自己技术不过关，都没成功，后来用了是LIVE/DEAD，就再也没有其他的了
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环境卫生、微生物学、卫生应急
9楼2013-12-08 16:12:29
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