我现在实验是做固态发酵,需要测定发酵前后多肽含量有无变化,想请问能测定么?怎么测?谢谢回答! 返回小木虫查看更多
你有标准品么? 如果没有,只能检测一个相对值了。
我要做寡肽了,真烦心
我也是做相关的试验,要测内切蛋白酶活力,苦于找不到方法,所以打算从多肽入手,以下是我个人的一些想法 肽是一类有较高生理活性的中小(分子量MW小于等于2300)蛋白质。高分子蛋白质MW大于等于300)易为单宁在酸性条件下沉淀。因此,将肽液经酸化后,加单宁使高分了物质沉淀,再测定滤液中蛋白质(多肽和游离氨基酸)和游离氨基酸的含量,最后用滤液中蛋白质含量减去氨基酸含量即为多肽的含量。 不知道是否可行
样品中 蛋白肽的测定方法 1、原理 测定样品经三氯醋酸处理后上清液中蛋白质含量,既为样品中大豆蛋白肽的含量,也就是可溶性蛋白质(TCA)的含量。 2、试剂 所用试剂均用不含氨的蒸馏水配制。 2.1 10%三氯醋酸 其它试剂与《食品中蛋白质的测定方法》中2.1—2.6相同 3、仪器 定氮蒸馏装置 4、操作方法 4.1样品处理 4.1.1固体样品:精密称取2g左右固体样品用小烧杯溶解,并用玻璃棒搅拌,定容至100ml容量瓶中,取10ml注入比色管中,再加作入10ml 10%三氯醋酸,静止沉降30分钟后,过滤(或用离心机1万转离5分钟)取滤液(或上清液)5ml注入干燥的凯氏瓶中,加入2g催化剂及25ml混合酸,消化方法同蛋白质的测定方法相同 4.1.2样品:(如发酵液)经离心机1万转离5分钟吸取上清液10ml注入比色管中再加10ml 10%三氯醋酸,静止沉降30分钟后,过滤(或用离心机1万转离5分钟)取滤液(或上清液)5ml注入干燥凯氏瓶中,加2g催化剂及25ml混合酸进行消化。 4.2 蒸馏方法与蛋白质的测定方法相同。 4.3 计算 X=(V1-V2)×N×0.014×6.25×10/m×20/10×1/5×100/10×100 式中: X—样品中可溶性蛋白质含量,% ; V1—样品消耗硫酸或盐酸标准溶液体积,ml ; V2—试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液体积,ml ; N—硫酸或盐酸标准溶液当量浓度 ; 0.014—1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数 ; 6.25—氮换算为蛋白质的系数。 [ Last edited by abcde420 on 2008-10-17 at 10:52 ],
希望交流关于肽方面的相关知识,谢谢!QQ328646132
可以试一试凯氏定氮法
谢谢大家啊
你有标准品么?
如果没有,只能检测一个相对值了。
我要做寡肽了,真烦心
我也是做相关的试验,要测内切蛋白酶活力,苦于找不到方法,所以打算从多肽入手,以下是我个人的一些想法
肽是一类有较高生理活性的中小(分子量MW小于等于2300)蛋白质。高分子蛋白质MW大于等于300)易为单宁在酸性条件下沉淀。因此,将肽液经酸化后,加单宁使高分了物质沉淀,再测定滤液中蛋白质(多肽和游离氨基酸)和游离氨基酸的含量,最后用滤液中蛋白质含量减去氨基酸含量即为多肽的含量。
不知道是否可行
样品中
蛋白肽的测定方法
1、原理
测定样品经三氯醋酸处理后上清液中蛋白质含量,既为样品中大豆蛋白肽的含量,也就是可溶性蛋白质(TCA)的含量。
2、试剂
所用试剂均用不含氨的蒸馏水配制。
2.1 10%三氯醋酸
其它试剂与《食品中蛋白质的测定方法》中2.1—2.6相同
3、仪器
定氮蒸馏装置
4、操作方法
4.1样品处理
4.1.1固体样品:精密称取2g左右固体样品用小烧杯溶解,并用玻璃棒搅拌,定容至100ml容量瓶中,取10ml注入比色管中,再加作入10ml 10%三氯醋酸,静止沉降30分钟后,过滤(或用离心机1万转离5分钟)取滤液(或上清液)5ml注入干燥的凯氏瓶中,加入2g催化剂及25ml混合酸,消化方法同蛋白质的测定方法相同
4.1.2样品:(如发酵液)经离心机1万转离5分钟吸取上清液10ml注入比色管中再加10ml 10%三氯醋酸,静止沉降30分钟后,过滤(或用离心机1万转离5分钟)取滤液(或上清液)5ml注入干燥凯氏瓶中,加2g催化剂及25ml混合酸进行消化。
4.2 蒸馏方法与蛋白质的测定方法相同。
4.3 计算
X=(V1-V2)×N×0.014×6.25×10/m×20/10×1/5×100/10×100
式中:
X—样品中可溶性蛋白质含量,% ;
V1—样品消耗硫酸或盐酸标准溶液体积,ml ;
V2—试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液体积,ml ;
N—硫酸或盐酸标准溶液当量浓度 ;
0.014—1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数 ;
6.25—氮换算为蛋白质的系数。
[ Last edited by abcde420 on 2008-10-17 at 10:52 ],
希望交流关于肽方面的相关知识,谢谢!QQ328646132
可以试一试凯氏定氮法
谢谢大家啊