用cDNA扩增一个基因,总是扩增出带有内含子的片段
各位虫友,我要扩增一个基因的cDNA序列,扩增出来的片段总是带有内含子的。因为之前做过RACE,知道序列是怎么样的。要扩增基因全长的时候总是扩增出带有内含子的片段。多次提了RNA,并且这些cDNA我也用来扩增其他的基因,十几个基因都没有问题,跑胶也没有看到DNA的条带,单单这一个基因扩增出来的片段不对。
请问有没有什么好办法,原因是什么? 返回小木虫查看更多
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各位虫友,我要扩增一个基因的cDNA序列,扩增出来的片段总是带有内含子的。因为之前做过RACE,知道序列是怎么样的。要扩增基因全长的时候总是扩增出带有内含子的片段。多次提了RNA,并且这些cDNA我也用来扩增其他的基因,十几个基因都没有问题,跑胶也没有看到DNA的条带,单单这一个基因扩增出来的片段不对。
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可能这个基因的某一个亚型就是带有这个内含子片段。换句话说,在某种细胞中可能这个内含子不被识别出来,存在一个带有它的剪切拼接亚型。如果一定要p出来和数据库一样的序列,要么就换个细胞要么就基因合成,现在基因合成也不算贵。
有没有可能是引物的问题,直接从基因组扩增了?
有可能,我考虑下基因合成,多谢
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这个引物是根据转录组和RACE的序列出来的。并且我用的cDNA,不应该有基因组DNA的扩增啊
这个引物是根据转录组和RACE的序列出来的。并且我用的cDNA,不应该有基因组DNA的扩增啊