【求助】HPLC如何分开两峰
用HPLC1100做槟榔药材的生物碱含量测定,测定三种生物碱:去甲基槟榔次碱,槟榔次碱,槟榔碱,此顺序也为出峰顺序,用0.5%磷酸和乙腈(40:60)等度洗脱,所有峰可以在10min内出完,但图谱之中,槟榔次碱峰总是连着另一个未知峰,而且连得很紧,怎么分都分不开,影响了槟榔次碱的含量测定,而且同样的样品我进样的重现性也差,请问怎样才能分开两峰呢 返回小木虫查看更多
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用HPLC1100做槟榔药材的生物碱含量测定,测定三种生物碱:去甲基槟榔次碱,槟榔次碱,槟榔碱,此顺序也为出峰顺序,用0.5%磷酸和乙腈(40:60)等度洗脱,所有峰可以在10min内出完,但图谱之中,槟榔次碱峰总是连着另一个未知峰,而且连得很紧,怎么分都分不开,影响了槟榔次碱的含量测定,而且同样的样品我进样的重现性也差,请问怎样才能分开两峰呢 返回小木虫查看更多
你说的怎么分都分不开,是都用过什么方法啊?仅改变了磷酸和乙腈的比例,还是其他流动相也尝试过了呢?如果酸化过强,对柱子的分离效果也有影响的。我们一般用的是0.1%的磷酸水。
楼主的意思应该是调整了比例也没分开,可以尝试不同ph值或更换其它缓冲盐试试
如果那两个连在一起的峰是同分异构体,lz就杯具了。可是试试加单标,用来确定是否为同分异构体,如果是,建议考虑别的定量和定性的方法,RP-HPLC很难分开同分异构体。如果不是同分异构体,建议考虑调整流动相pH值。
谢谢各位高手的指点,我换过流动相的比例,0.5%磷酸参照的是文献,还没有变过,可以去尝试一下,PH原来用三乙胺调的3.8,后来调到3.5,分离效果没有改善,就没有调了,应该不是同分异构体,不知各位还可否指点一下,而且同样的方法一个月以前做的比现在做的分离效果要好,
生物碱本来就很难分离,楼主提到的三种生物碱要想较好的分离度和峰型最好尝试采用极性C18来梯度分离。至于重复性原因是楼主采用的添加剂为磷酸,建议采用盐来分离这样会更好一些
调流动相比例,或者换流动相试试应该能解决的