发酵染菌，做着做着更加没有头绪了，酵母发酵会是有杂菌污染，多个批次都是感染同样的菌，革兰氏阳性杆菌，按照发酵染菌的各个步骤进行排除，已经觉得不能发现有什么问题了，有时候，这一罐没有染菌的，然后操作过程保持一样的情况下，这个罐在下一批次的时候就有染菌了。以下是各工段的叙述。
培养基灭菌后空培养两天，溶氧维持在100%左右，平板验证合格。分批期平板检测和镜检合格，没有发现染菌；甘油补料期平板检测和镜检合格，没有发现染菌。甲醇诱导期，诱导8h镜检和平板检测没有染菌，在诱导24h（有时候会是在诱导36h）镜检看得到有革兰氏阳性杆菌污染，一般在诱导48h镜检没有染菌的，该批次的发酵都是没有染菌的。（可能该杂菌在此基础盐培养基中不适合生长）
（1）发酵种子液，发酵种子液在上罐前进行了镜检检测，没有发现有染菌情况。而且该污染的革兰氏阳性杆菌在YPG培养基中是生长较快的，过夜培养就能长起            来，所以认为发酵种子液的制备是没有问题的。
（2）空气系统，已经更换了新的空气过滤器，而且在该过滤器使用过程中做到过没有染菌的批次。认为过滤器染菌多是球菌，而且在持续通气的过程中，染菌应该不会每次都是在诱导24到48h之间镜检发现。认为空气系统没有问题。
（3）补料，甘油补料经过121℃灭菌30min，灭菌两次（过夜放凉后第二天再次进行灭菌），甘油补料完毕后，在下罐时对甘油进行液体培养基和固体培养基验证，均无菌落生长。甲醇使用0.22uM滤膜进行过滤，同样经过培养基的验证，没有菌落生成。还有没有验证的是EDTA，EDTA是过滤除菌的，在诱导前加入。
（4）发酵罐，在上罐前进行了保压验证，在1h内，保压成功。曾经尝试过过夜保压是没有问题的（按经验，1h内没有罐压没有下降的，认为是合格的。）
（5）发酵罐实消，发酵罐实消温度提高到123℃以上，压力在0.12mpa以上，灭菌35min，消罐没有消不到的地方。
明明这一罐成功的了，可以做到无菌，怎么.....怎么....下一罐就不行了呢，就不行了呢！！！！！！！
染菌过后，发酵离心上清变得很澄清，产物会是出现降解。
望解救....想要以身相许的心都有了


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