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大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长曲线求教 已有6人参与
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最近做一个实验项目，验证之前做出的消毒液对于大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀菌效果。我的思路是：绘制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长曲线，通过酶标仪测量OD600值，找出细菌生长的对数期，然后把这个时期的菌悬液与我的消毒液作用，看看杀菌效果，既然对数期都能有很好的杀菌效果，那么这个消毒液的杀菌效果就好。 具体做法是：从平板里接种一环大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的单菌落于20ml装有MH肉汤的试管中。放到摇床去摇。37℃。每隔两小时取一次样。空白对照组用的是MH肉汤。 结果发现经过40h，所测得的OD值偏小。40h大肠杆菌的的OD值是0.33左右，金黄色葡萄球菌的OD值是0.27左右。而且OD值的增加也是不紧不慢，每次也就增加0.02而已。 请教各位网友造成OD值偏小的原因是什么呢？是用的液体培养基不可以？或者是往96孔板中加样的时候加了100ul，加样量少？ 现在金黄色葡萄球菌的试管底部都有沉淀产生了。OD值也不增加了。对数期应该是过了，但是看数据发现第十八小时的时候OD值增加的最多，比前一次增加0.05.增加后的OD值是0.13但是也是偏小吧。对数期的od值是不是要达到0.6呢？ 请各位大神不吝赐教，谢谢！！！  737249821477234875.jpg  715378664553592464.jpg |
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这个实验设计问题太多了，首先，没有阳性对照！ 其次，你的菌浓度初始值都没有测OD值么，必须做至少3-5组平行组啊，最好多做点，取平均值。初始值我觉得还是偏高的，一般开始的菌浓度我都是用的麦氏0.5左右。 第三，用MH培养基做金葡，效果不会太好，建议用LB，大肠也是！ 第四，试管法培养是摇不了的，你用超过150RPM，试管都放不稳。。。建议用微量板做！不是96孔板，有微生物用的那种板，里面是半圆形的小孔，可以试试。用板的话，就不需要摇了，做一排平行对照，每次测定的时候用掉一孔。 第五，你这个方法测定OD，显然是错误的，每次取一点，体积就小了，然后初始体积和最终体积会差很多！ 第六，杀菌剂浓度梯度都没做。。。。。要做微量稀释法的。。。！！！！！ |
4楼2017-08-22 09:02:14
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我的金葡抑菌实验是这样做的： 1.取单菌落至~3 ml TSB培养基（用50mlEP 管就行），37℃~14 h， 2.20倍稀释（50ul菌液至950ul TSB培养基），用TSB培养基调零，（此时OD600大概在0.4-0.6，如果不是，稀释至0.5左右） 3.将原菌液稀释至OD600为0.5，约为4ml左右，加入相应浓度的药物，至37℃摇床，每2h取一次样（50ul菌液至950ul TSB培养基），测 OD600,同时设置对照（即原菌液稀释至OD600为0.5，约为4ml左右，不加药物），此时已然要用TSB培养基调零， |
8楼2017-08-23 14:35:14
snoopytbw
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5楼2017-08-23 09:25:28
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对的，实验组需要减去空白OD。 避免体积损失的方法，很多。可以用半连续培养法，也可以用大一点的锥形瓶比如1L的，每次你用无菌移液管，只吸取1ml以内，用酶标板测OD，貌似200ul就够了，这样损失几乎可以忽略。当然我只不过举例，也没必要真的用1L体积。。不过我还是建议你多做几个平行，这样准一点。 半连续培养法，其实就是定期转移一定量的菌液进入新的体系里面，做出来的生长曲线略平，貌似可以修正的。其实差别不会太大，你想相当于每次转移掉你需要测OD的体积，然后补一点进去。分母位置差别不大，不过时间长了会有的差异的，可以用罗氏曲线函数回归修正 |
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6楼2017-08-23 11:19:30
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谢谢解答。我想还是做几个平行吧，我想再请教您：1.如果我要每隔两小时测定一下,一共测24h的话，这样就得取12个点，是不是应该做12组平行呢？然后到点从这12组里任取三组或5组测一下OD值求平均数，而不是从这12组里面任取1组测3次或5次求平均值，这思路对么？可是这12组平行一开始接种菌的数量也会有差异吧，这也有误差。2.还有您说的，我应该是从菌浓度达到0.5麦氏单位（也就是OD值0.13-0.15左右）时才开始计算时间对么？3.您说的阳性对照组是测OD值时设定的阳性对照组么？4.我将消毒剂（4.5ml）与菌液（0.5ml）混合后1min，2min，5min，10min，随后取混合液1ml于培养皿中，倒入琼脂培养基，待凝固后，放入恒温培养箱，48h后看实验结果。（阳性对照组就是菌悬液，阴性对照组是中和剂）我是想用这种思路来进行实验。这样的话依然要做杀菌剂浓度梯度稀释对么？稀释的话要稀释多少倍呢？望大神不吝赐教，谢谢！ |
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