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齐国小药童木虫 (著名写手)
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大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长曲线求教 已有6人参与
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最近做一个实验项目，验证之前做出的消毒液对于大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀菌效果。我的思路是：绘制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长曲线，通过酶标仪测量OD600值，找出细菌生长的对数期，然后把这个时期的菌悬液与我的消毒液作用，看看杀菌效果，既然对数期都能有很好的杀菌效果，那么这个消毒液的杀菌效果就好。 具体做法是：从平板里接种一环大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的单菌落于20ml装有MH肉汤的试管中。放到摇床去摇。37℃。每隔两小时取一次样。空白对照组用的是MH肉汤。 结果发现经过40h，所测得的OD值偏小。40h大肠杆菌的的OD值是0.33左右，金黄色葡萄球菌的OD值是0.27左右。而且OD值的增加也是不紧不慢，每次也就增加0.02而已。 请教各位网友造成OD值偏小的原因是什么呢？是用的液体培养基不可以？或者是往96孔板中加样的时候加了100ul，加样量少？ 现在金黄色葡萄球菌的试管底部都有沉淀产生了。OD值也不增加了。对数期应该是过了，但是看数据发现第十八小时的时候OD值增加的最多，比前一次增加0.05.增加后的OD值是0.13但是也是偏小吧。对数期的od值是不是要达到0.6呢？ 请各位大神不吝赐教，谢谢！！！  737249821477234875.jpg  715378664553592464.jpg |
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我的金葡抑菌实验是这样做的： 1.取单菌落至~3 ml TSB培养基（用50mlEP 管就行），37℃~14 h， 2.20倍稀释（50ul菌液至950ul TSB培养基），用TSB培养基调零，（此时OD600大概在0.4-0.6，如果不是，稀释至0.5左右） 3.将原菌液稀释至OD600为0.5，约为4ml左右，加入相应浓度的药物，至37℃摇床，每2h取一次样（50ul菌液至950ul TSB培养基），测 OD600,同时设置对照（即原菌液稀释至OD600为0.5，约为4ml左右，不加药物），此时已然要用TSB培养基调零， |
8楼2017-08-23 14:35:14
2楼2017-08-20 23:13:52
齐国小药童
木虫 (著名写手)
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这个实验设计问题太多了，首先，没有阳性对照！ 其次，你的菌浓度初始值都没有测OD值么，必须做至少3-5组平行组啊，最好多做点，取平均值。初始值我觉得还是偏高的，一般开始的菌浓度我都是用的麦氏0.5左右。 第三，用MH培养基做金葡，效果不会太好，建议用LB，大肠也是！ 第四，试管法培养是摇不了的，你用超过150RPM，试管都放不稳。。。建议用微量板做！不是96孔板，有微生物用的那种板，里面是半圆形的小孔，可以试试。用板的话，就不需要摇了，做一排平行对照，每次测定的时候用掉一孔。 第五，你这个方法测定OD，显然是错误的，每次取一点，体积就小了，然后初始体积和最终体积会差很多！ 第六，杀菌剂浓度梯度都没做。。。。。要做微量稀释法的。。。！！！！！ |
4楼2017-08-22 09:02:14
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