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齐国小药童

木虫 (著名写手)

[交流] 大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长曲线求教 已有6人参与

最近做一个实验项目,验证之前做出的消毒液对于大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀菌效果。我的思路是:绘制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长曲线,通过酶标仪测量OD600值,找出细菌生长的对数期,然后把这个时期的菌悬液与我的消毒液作用,看看杀菌效果,既然对数期都能有很好的杀菌效果,那么这个消毒液的杀菌效果就好。
具体做法是:从平板里接种一环大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的单菌落于20ml装有MH肉汤的试管中。放到摇床去摇。37℃。每隔两小时取一次样。空白对照组用的是MH肉汤。
结果发现经过40h,所测得的OD值偏小。40h大肠杆菌的的OD值是0.33左右,金黄色葡萄球菌的OD值是0.27左右。而且OD值的增加也是不紧不慢,每次也就增加0.02而已。
请教各位网友造成OD值偏小的原因是什么呢?是用的液体培养基不可以?或者是往96孔板中加样的时候加了100ul,加样量少?
现在金黄色葡萄球菌的试管底部都有沉淀产生了。OD值也不增加了。对数期应该是过了,但是看数据发现第十八小时的时候OD值增加的最多,比前一次增加0.05.增加后的OD值是0.13但是也是偏小吧。对数期的od值是不是要达到0.6呢?
请各位大神不吝赐教,谢谢!!!

大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长曲线求教
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大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长曲线求教-1
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我就是我,是颜色不一样的焰火
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齐国小药童

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 雨季001 at 2017-08-20 23:13:52
试管里放这么多,菌能摇起来?不是应该在小的锥形瓶里吗

谢谢您的建议,那我用锥形瓶再摇一下试试。还有我想问一下,往九十六孔板里面加样量是100ul好呢还是200ul好呢?
我就是我,是颜色不一样的焰火
3楼2017-08-21 08:38:43
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雨季001

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
试管里放这么多,菌能摇起来?不是应该在小的锥形瓶里吗

发自小木虫Android客户端
2楼2017-08-20 23:13:52
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这个实验设计问题太多了,首先,没有阳性对照!
其次,你的菌浓度初始值都没有测OD值么,必须做至少3-5组平行组啊,最好多做点,取平均值。初始值我觉得还是偏高的,一般开始的菌浓度我都是用的麦氏0.5左右。
第三,用MH培养基做金葡,效果不会太好,建议用LB,大肠也是!
第四,试管法培养是摇不了的,你用超过150RPM,试管都放不稳。。。建议用微量板做!不是96孔板,有微生物用的那种板,里面是半圆形的小孔,可以试试。用板的话,就不需要摇了,做一排平行对照,每次测定的时候用掉一孔。
第五,你这个方法测定OD,显然是错误的,每次取一点,体积就小了,然后初始体积和最终体积会差很多!
第六,杀菌剂浓度梯度都没做。。。。。要做微量稀释法的。。。!!!!!
4楼2017-08-22 09:02:14
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齐国小药童

木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-08-22 09:02:14
这个实验设计问题太多了,首先,没有阳性对照!
其次,你的菌浓度初始值都没有测OD值么,必须做至少3-5组平行组啊,最好多做点,取平均值。初始值我觉得还是偏高的,一般开始的菌浓度我都是用的麦氏0.5左右。
第三 ...

非常感谢您的建议和指正!请问我测出菌液的OD值是不是要减去空白对照的OD值呢?微量板我们实验室好像没有,我可以用锥形瓶摇么?还有针对您说的第五条,我该如何操作来避免体积减小的问题呢?
我就是我,是颜色不一样的焰火
5楼2017-08-23 09:25:28
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