想请教一下做RACE时,特异性引物的设计问题,以及如何根据同源保守区设计引物?
我是一个做分子生物学的新手,老师也没太多时间知道,所以的问题都要靠自己摸索。所以我的问题在您看来若很弱智,请您耐心的解答,非常感谢。
我想在利用RACE方法做植物上一个基因的全长,根据同源克隆法,利用DNAMAN比对序列后,如何选取保守区,选择保守区序列的位置和原则是什么?又如何根据保守区设计3‘引物和5’引物?还是先做3‘race,根据pcr产物再做5’race?非常感谢。 返回小木虫查看更多
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首先得NCBI上找到相似物种的cDNA序列,比对下,根据同源保守区(就是物种之间都没有变化的序列)设计两条GSP,两者之间隔个100bp-200bp左右吧!3‘RACE简单点
可是我的这个基因我选取的保守区,设计的引物GC含量都很低,已经设计了多条,都很低,该怎么办
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primer长度25-27bp左右吧,GC%有40吗?理论很多时候和实际不一样的,建议你多设计几条!3‘相对来说简单多了,问题应该不大。
确保每个引物的3‘端都在完全or最保守区。先做3端是正道。
在弱弱的问一下,我根据其他物种来寻找保守区,设计引物,是不是应该设计简并引物啊~~
因为我没有已知片段,我是不是应该先设计简并引物,P出一段序列,在做3‘端啊?