应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 抗体与核酸共价连接，sulfo-SMCC做交联剂
111/2返回列表12下一页
查看: 4578  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sysg07124

新虫 (初入文坛)

[求助] 抗体与核酸共价连接，sulfo-SMCC做交联剂 已有1人参与

现在做一个需要将抗体和核酸共价连接的实验，sulfo-SMCC做交联剂，开始用SMCC先活化抗体（室温2小时），然后用DTT还原巯基DNA（37℃ 1小时），分别过脱盐柱后混合透析，得到的产物跑SDS-PAGE，考蓝染色，在泳道的最顶端出现了条带（与marker相比分子量超过了250 kDa）。经验证，SMCC只与抗体混合，室温静置半小时就可以在泳道上端产生明显的条带，应该是抗体之间发生了交联。
然后又考虑用氨基的探针先与SMCC室温震荡孵育3小时，然后再与抗体孵育过夜，SDS-PAGE，考蓝染色，条带与纯抗体的对照完全没有差别。问题到底出在哪里，谁有具体的实验步骤可供参考？

抗体与核酸共价连接，sulfo-SMCC做交联剂
附件1.jpg@biostar2009
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2017-10-02 20:04:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

眼睛儿

新虫 (小有名气)
你这个电泳跑的漂亮

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2017-10-02 20:19:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

petty04

新虫 (职业作家)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-10-02 23:25:52
产生抗体与抗体的偶联应该是不可避免的，可能你需要计算好蛋白和核酸的摩尔比，用摩尔比远过量的巯基核酸做反应试试看，应该会一定程度上降低蛋白之间的偶联。另外，反应时尽量把蛋白调到较低浓度，降低蛋白互相之间碰撞偶联的几率

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

sysg07124
3楼2017-10-02 20:32:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

minecat

木虫 (初入文坛)
全程在缓冲液中加入螯合剂EDTA试试。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-10-02 20:42:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sysg07124

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by petty04 at 2017-10-02 20:32:51
产生抗体与抗体的偶联应该是不可避免的，可能你需要计算好蛋白和核酸的摩尔比，用摩尔比远过量的巯基核酸做反应试试看，应该会一定程度上降低蛋白之间的偶联。另外，反应时尽量把蛋白调到较低浓度，降低蛋白互相之间 ...

抗体与SMCC反应的时候还没有加核酸，所以应该不是抗体和核酸的比例问题吧。我想过稀释抗体，但是抗体与SMCC反应之后我是用一个最大上样量12微升的脱盐柱除过量SMCC的，如果稀释太多实验的成本上耗不起啊
另外我想问一下，你知道为什么如果SMCC先和氨基的DNA反应，除盐之后再与抗体孵育，理论上不是也可以吗，为什么我的电泳显示一点也没有标上去？如果SMCC能让这个抗体产生这么严重的交联，它表面的巯基应该挺多的吧？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-10-02 20:58:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvyongfeng
6楼2017-10-02 21:00:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sysg07124

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by minecat at 2017-10-02 20:42:32
全程在缓冲液中加入螯合剂EDTA试试。

请问加螯合剂的作用是什么？抗体与SMCC的反应我用的1X PBS，之后巯基DNA的还原和脱盐后与抗体的孵育缓冲液我都加了EDTA的

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2017-10-02 21:00:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sysg07124

新虫 (初入文坛)
抗体与核酸共价连接，sulfo-SMCC做交联剂-1

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
8楼2017-10-03 22:48:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sysg07124

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by sysg07124 at 2017-10-03 22:48:35

第一条泳道是纯抗体对照，后面四个分别是四次标记的结果，后两个是不是就已经算标上了，好像这种连接本身的效率就不是很高？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
9楼2017-10-03 22:50:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wrxnyd54

木虫 (著名写手)
观看中
回复此楼
10楼2017-10-04 02:16:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sysg07124 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +8 wangyl_123 2026-10-10 12/600 2026-10-13 20:40 by Merryya
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +9 Isak0320 2026-10-12 13/650 2026-10-13 11:57 by Isak0320
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +4 好运来～9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +6 13108017953 2026-10-08 6/300 2026-10-12 20:07 by w3w3y3
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭