| 查看: 3980 | 回复: 10 | ||
sysg07124新虫 (初入文坛)
|
[求助]
抗体与核酸共价连接，sulfo-SMCC做交联剂 已有1人参与
|
|
现在做一个需要将抗体和核酸共价连接的实验，sulfo-SMCC做交联剂，开始用SMCC先活化抗体（室温2小时），然后用DTT还原巯基DNA（37℃ 1小时），分别过脱盐柱后混合透析，得到的产物跑SDS-PAGE，考蓝染色，在泳道的最顶端出现了条带（与marker相比分子量超过了250 kDa）。经验证，SMCC只与抗体混合，室温静置半小时就可以在泳道上端产生明显的条带，应该是抗体之间发生了交联。 然后又考虑用氨基的探针先与SMCC室温震荡孵育3小时，然后再与抗体孵育过夜，SDS-PAGE，考蓝染色，条带与纯抗体的对照完全没有差别。问题到底出在哪里，谁有具体的实验步骤可供参考？  附件1.jpg@biostar2009 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有93人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
眼睛儿
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1232.9
- 散金: 50
- 红花: 2
- 帖子: 229
- 在线: 54小时
- 虫号: 5266881
- 注册: 2016-11-21
- 性别: GG
- 专业: 无机纳米化学
2楼2017-10-02 20:19:54
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-10-02 23:25:52
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-10-02 23:25:52
|
产生抗体与抗体的偶联应该是不可避免的，可能你需要计算好蛋白和核酸的摩尔比，用摩尔比远过量的巯基核酸做反应试试看，应该会一定程度上降低蛋白之间的偶联。另外，反应时尽量把蛋白调到较低浓度，降低蛋白互相之间碰撞偶联的几率 发自小木虫Android客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
3楼2017-10-02 20:32:51
4楼2017-10-02 20:42:32
sysg07124
新虫 (初入文坛)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 859.5
- 散金: 204
- 帖子: 42
- 在线: 14.9小时
- 虫号: 3279962
- 注册: 2014-06-18
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
送红花一朵 |
抗体与SMCC反应的时候还没有加核酸，所以应该不是抗体和核酸的比例问题吧。我想过稀释抗体，但是抗体与SMCC反应之后我是用一个最大上样量12微升的脱盐柱除过量SMCC的，如果稀释太多实验的成本上耗不起啊 另外我想问一下，你知道为什么如果SMCC先和氨基的DNA反应，除盐之后再与抗体孵育，理论上不是也可以吗，为什么我的电泳显示一点也没有标上去？如果SMCC能让这个抗体产生这么严重的交联，它表面的巯基应该挺多的吧？ 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2017-10-02 20:58:40
 |
6楼2017-10-02 21:00:09
sysg07124
新虫 (初入文坛)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 859.5
- 散金: 204
- 帖子: 42
- 在线: 14.9小时
- 虫号: 3279962
- 注册: 2014-06-18
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
7楼2017-10-02 21:00:51
sysg07124
新虫 (初入文坛)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 859.5
- 散金: 204
- 帖子: 42
- 在线: 14.9小时
- 虫号: 3279962
- 注册: 2014-06-18
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
8楼2017-10-03 22:48:35
sysg07124
新虫 (初入文坛)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 859.5
- 散金: 204
- 帖子: 42
- 在线: 14.9小时
- 虫号: 3279962
- 注册: 2014-06-18
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
9楼2017-10-03 22:50:40
10楼2017-10-04 02:16:54