[求助] 抗体与核酸共价连接，sulfo-SMCC做交联剂已有1人参与

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1楼2017-10-02 20:04:44

眼睛儿

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你这个电泳跑的漂亮

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2楼2017-10-02 20:19:54

petty04

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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-10-02 23:25:52

产生抗体与抗体的偶联应该是不可避免的，可能你需要计算好蛋白和核酸的摩尔比，用摩尔比远过量的巯基核酸做反应试试看，应该会一定程度上降低蛋白之间的偶联。另外，反应时尽量把蛋白调到较低浓度，降低蛋白互相之间碰撞偶联的几率

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sysg07124

3楼2017-10-02 20:32:51

minecat

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全程在缓冲液中加入螯合剂EDTA试试。

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4楼2017-10-02 20:42:32

sysg07124

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引用回帖:

3楼: Originally posted by petty04 at 2017-10-02 20:32:51
产生抗体与抗体的偶联应该是不可避免的，可能你需要计算好蛋白和核酸的摩尔比，用摩尔比远过量的巯基核酸做反应试试看，应该会一定程度上降低蛋白之间的偶联。另外，反应时尽量把蛋白调到较低浓度，降低蛋白互相之间 ...

抗体与SMCC反应的时候还没有加核酸，所以应该不是抗体和核酸的比例问题吧。我想过稀释抗体，但是抗体与SMCC反应之后我是用一个最大上样量12微升的脱盐柱除过量SMCC的，如果稀释太多实验的成本上耗不起啊
另外我想问一下，你知道为什么如果SMCC先和氨基的DNA反应，除盐之后再与抗体孵育，理论上不是也可以吗，为什么我的电泳显示一点也没有标上去？如果SMCC能让这个抗体产生这么严重的交联，它表面的巯基应该挺多的吧？

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5楼2017-10-02 20:58:40