应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 抗体与核酸共价连接，sulfo-SMCC做交联剂
111/2返回列表12下一页
查看: 4502  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sysg07124

新虫 (初入文坛)

[求助] 抗体与核酸共价连接，sulfo-SMCC做交联剂 已有1人参与

现在做一个需要将抗体和核酸共价连接的实验，sulfo-SMCC做交联剂，开始用SMCC先活化抗体（室温2小时），然后用DTT还原巯基DNA（37℃ 1小时），分别过脱盐柱后混合透析，得到的产物跑SDS-PAGE，考蓝染色，在泳道的最顶端出现了条带（与marker相比分子量超过了250 kDa）。经验证，SMCC只与抗体混合，室温静置半小时就可以在泳道上端产生明显的条带，应该是抗体之间发生了交联。
然后又考虑用氨基的探针先与SMCC室温震荡孵育3小时，然后再与抗体孵育过夜，SDS-PAGE，考蓝染色，条带与纯抗体的对照完全没有差别。问题到底出在哪里，谁有具体的实验步骤可供参考？

抗体与核酸共价连接，sulfo-SMCC做交联剂
附件1.jpg@biostar2009
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2017-10-02 20:04:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

眼睛儿

新虫 (小有名气)
你这个电泳跑的漂亮

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2017-10-02 20:19:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

petty04

新虫 (职业作家)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-10-02 23:25:52
产生抗体与抗体的偶联应该是不可避免的，可能你需要计算好蛋白和核酸的摩尔比，用摩尔比远过量的巯基核酸做反应试试看，应该会一定程度上降低蛋白之间的偶联。另外，反应时尽量把蛋白调到较低浓度，降低蛋白互相之间碰撞偶联的几率

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

sysg07124
3楼2017-10-02 20:32:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

minecat

木虫 (初入文坛)
全程在缓冲液中加入螯合剂EDTA试试。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-10-02 20:42:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sysg07124

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by petty04 at 2017-10-02 20:32:51
产生抗体与抗体的偶联应该是不可避免的，可能你需要计算好蛋白和核酸的摩尔比，用摩尔比远过量的巯基核酸做反应试试看，应该会一定程度上降低蛋白之间的偶联。另外，反应时尽量把蛋白调到较低浓度，降低蛋白互相之间 ...

抗体与SMCC反应的时候还没有加核酸，所以应该不是抗体和核酸的比例问题吧。我想过稀释抗体，但是抗体与SMCC反应之后我是用一个最大上样量12微升的脱盐柱除过量SMCC的，如果稀释太多实验的成本上耗不起啊
另外我想问一下，你知道为什么如果SMCC先和氨基的DNA反应，除盐之后再与抗体孵育，理论上不是也可以吗，为什么我的电泳显示一点也没有标上去？如果SMCC能让这个抗体产生这么严重的交联，它表面的巯基应该挺多的吧？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-10-02 20:58:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvyongfeng
6楼2017-10-02 21:00:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sysg07124

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by minecat at 2017-10-02 20:42:32
全程在缓冲液中加入螯合剂EDTA试试。

请问加螯合剂的作用是什么？抗体与SMCC的反应我用的1X PBS，之后巯基DNA的还原和脱盐后与抗体的孵育缓冲液我都加了EDTA的

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2017-10-02 21:00:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sysg07124

新虫 (初入文坛)
抗体与核酸共价连接，sulfo-SMCC做交联剂-1

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
8楼2017-10-03 22:48:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sysg07124

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by sysg07124 at 2017-10-03 22:48:35

第一条泳道是纯抗体对照，后面四个分别是四次标记的结果，后两个是不是就已经算标上了，好像这种连接本身的效率就不是很高？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
9楼2017-10-03 22:50:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wrxnyd54

木虫 (著名写手)
观看中
回复此楼
10楼2017-10-04 02:16:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sysg07124 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 06:22 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-30 06:02 by ZPa0EcMwuECS
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-30 05:48 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 3/150 2026-08-30 02:22 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 02:09 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 01:12 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-30 00:41 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +4 tannykie 2026-08-29 4/200 2026-08-29 17:14 by lmz0216
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +5 gdd2018 2026-08-28 10/500 2026-08-29 14:10 by Jacob678
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭