应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 抗体与核酸共价连接，sulfo-SMCC做交联剂
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
111/2返回列表12下一页
查看: 4130  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sysg07124

新虫 (初入文坛)

[求助] 抗体与核酸共价连接，sulfo-SMCC做交联剂 已有1人参与

现在做一个需要将抗体和核酸共价连接的实验，sulfo-SMCC做交联剂，开始用SMCC先活化抗体（室温2小时），然后用DTT还原巯基DNA（37℃ 1小时），分别过脱盐柱后混合透析，得到的产物跑SDS-PAGE，考蓝染色，在泳道的最顶端出现了条带（与marker相比分子量超过了250 kDa）。经验证，SMCC只与抗体混合，室温静置半小时就可以在泳道上端产生明显的条带，应该是抗体之间发生了交联。
然后又考虑用氨基的探针先与SMCC室温震荡孵育3小时，然后再与抗体孵育过夜，SDS-PAGE，考蓝染色，条带与纯抗体的对照完全没有差别。问题到底出在哪里，谁有具体的实验步骤可供参考？

抗体与核酸共价连接，sulfo-SMCC做交联剂
附件1.jpg@biostar2009
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2017-10-02 20:04:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

眼睛儿

新虫 (小有名气)
你这个电泳跑的漂亮

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2017-10-02 20:19:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

petty04

新虫 (职业作家)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-10-02 23:25:52
产生抗体与抗体的偶联应该是不可避免的，可能你需要计算好蛋白和核酸的摩尔比，用摩尔比远过量的巯基核酸做反应试试看，应该会一定程度上降低蛋白之间的偶联。另外，反应时尽量把蛋白调到较低浓度，降低蛋白互相之间碰撞偶联的几率

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

sysg07124
3楼2017-10-02 20:32:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

minecat

木虫 (初入文坛)
全程在缓冲液中加入螯合剂EDTA试试。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-10-02 20:42:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sysg07124

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by petty04 at 2017-10-02 20:32:51
产生抗体与抗体的偶联应该是不可避免的，可能你需要计算好蛋白和核酸的摩尔比，用摩尔比远过量的巯基核酸做反应试试看，应该会一定程度上降低蛋白之间的偶联。另外，反应时尽量把蛋白调到较低浓度，降低蛋白互相之间 ...

抗体与SMCC反应的时候还没有加核酸，所以应该不是抗体和核酸的比例问题吧。我想过稀释抗体，但是抗体与SMCC反应之后我是用一个最大上样量12微升的脱盐柱除过量SMCC的，如果稀释太多实验的成本上耗不起啊
另外我想问一下，你知道为什么如果SMCC先和氨基的DNA反应，除盐之后再与抗体孵育，理论上不是也可以吗，为什么我的电泳显示一点也没有标上去？如果SMCC能让这个抗体产生这么严重的交联，它表面的巯基应该挺多的吧？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-10-02 20:58:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvyongfeng
6楼2017-10-02 21:00:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sysg07124

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by minecat at 2017-10-02 20:42:32
全程在缓冲液中加入螯合剂EDTA试试。

请问加螯合剂的作用是什么？抗体与SMCC的反应我用的1X PBS，之后巯基DNA的还原和脱盐后与抗体的孵育缓冲液我都加了EDTA的

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2017-10-02 21:00:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sysg07124

新虫 (初入文坛)
抗体与核酸共价连接，sulfo-SMCC做交联剂-1

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
8楼2017-10-03 22:48:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sysg07124

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by sysg07124 at 2017-10-03 22:48:35

第一条泳道是纯抗体对照，后面四个分别是四次标记的结果，后两个是不是就已经算标上了，好像这种连接本身的效率就不是很高？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
9楼2017-10-03 22:50:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wrxnyd54

木虫 (著名写手)
观看中
回复此楼
10楼2017-10-04 02:16:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sysg07124 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 275求调剂 +11 Micky11223 2026-03-25 16/800 2026-03-29 14:27 by 1018329917
[考研] 0856材料化工调剂 总分330 +14 zhubinhao 2026-03-27 14/700 2026-03-29 10:01 by Sjndkwm
[考研] 0703 化学 求调剂，一志愿山东大学 342 分 +4 Shern—- 2026-03-28 4/200 2026-03-29 00:47 by 544594351
[考研] 11408软件工程求调剂 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 21:50 by zhq0425
[考研] 0703一志愿9，初试成绩：338，四六级已过，有科研经历，求调剂！ +4 Zuhui0306 2026-03-25 4/200 2026-03-28 13:07 by 唐沐儿
[考研] 085701环境工程，267求调剂 +16 minht 2026-03-26 16/800 2026-03-28 12:16 by zllcz
[考研] 286求调剂 +12 PolarBear11 2026-03-26 12/600 2026-03-28 12:14 by zllcz
[考研] 286求调剂 +4 丢掉懒惰 2026-03-27 7/350 2026-03-28 08:07 by baoball
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +9 丹青奶盖 2026-03-26 10/500 2026-03-28 07:45 by barnett0632
[考研] 352分 化工与材料 +5 海纳百川Ly 2026-03-27 5/250 2026-03-28 03:39 by fmesaito
[考研] 安徽大学专硕生物与医药专业(086000)324分，英语已过四六级，六级521，求调剂 +4 美味可乐鸡翅 2026-03-26 4/200 2026-03-27 15:27 by 星空星月
[考研] 085600材料与化工调剂 +10 A-哆啦Z梦 2026-03-23 16/800 2026-03-27 15:13 by caszguilin
[考研] 化学308分求调剂 +8 你好明天你好 2026-03-23 9/450 2026-03-27 14:01 by 杨光于青云
[考研] 一志愿211，335分，0856，求调剂院校和导师 +4 倾____萧 2026-03-27 5/250 2026-03-27 11:52 by zhshch
[考研] 343求调剂 +4 赠我一本书 2026-03-23 4/200 2026-03-27 00:40 by wxiongid
[考研] 333求调剂 +6 wfh030413@ 2026-03-23 6/300 2026-03-26 22:45 by 学员8dgXkO
[考研] 材料考研求调剂 +3 Dendel 2026-03-23 6/300 2026-03-26 17:51 by fmesaito
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 【2026考研调剂】制药工程 284分 求相关专业调剂名额 +4 袁奂奂 2026-03-25 8/400 2026-03-25 14:32 by lbsjt
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭