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ELISA提高抗原抗体特异性结合

作者 cgkbhf: 来源: 小木虫 500 10 举报帖子

请教各位大神！
我最近在做ELISA，先在酶标板包被抗原，然后加入少量能够和抗原特异性结合的酶标抗体（按理论计算抗原摩尔量远大于酶标抗体），发现就算是怎么增大包被抗原量，酶标抗体（始终定量）最多只能减少30%（通过测反应前后OD值确定），感觉抗原饱和了，为什么会出现这种情况？我想至少结合60%，该怎么做？我只有5金币了，各位大神帮忙分析一下。感激不尽！！！返回小木虫查看更多

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精华评论

cgkbhf

引用回帖:
8楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-08 07:50:22
我知道你的实验过程了，但是我还是没弄清楚你的实验目的。有几点可以讨论一下1.拿酶标抗体减少的OD值和显色的OD值比较是没有意义的。具体请查看朗伯比尔定律。他们有不同的吸光系数。2.如果需要抗原全部占据，你包被 ...

我的目的是找到能够将200ul酶标抗体（浓度稀释10E5）全部结合掉的抗原量，但是发现不管怎么增加包被抗原量都没法将加入的抗体全部结合。我不需要考虑抗原是否全被占据，只要抗体全被结合就行了。
Ag+Ab=Ag*Ab Ab的量固定不变，找出方法能够将Ab全部转化或者大部分转化为Ag*Ab
，
yyy0305

抗原抗体反应是可逆的，会最后形成动态平衡，如果抗原过量不行的话，你只有抗体少量了，酶联抗体的稀释倍数你看能不能调整
cgkbhf

引用回帖:
10楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-08 12:05:31
抗原抗体反应是可逆的，会最后形成动态平衡，如果抗原过量不行的话，你只有抗体少量了，酶联抗体的稀释倍数你看能不能调整

有没有什么办法在不改变抗体稀释倍数的情况下，使Ag+Ab=Ag*Ab平衡右移。