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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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hermioner

银虫 (小有名气)

[求助] 求助!GST tag在纯化挂柱的过程中断掉怎么解决已有1人参与

求助!
我的蛋白诱导表达以后直接挂GST柱子,
挂柱的SDS-PAGE图如下。
我的蛋白大小应该是红色箭头指示的位置
但是目的蛋白量很少,下面蛋白量很多的是GST的大小,也就是蛋白断掉了?
不知道为什么,求助~~
附上gst和蛋白中间的序列图谱~

求助!GST tag在纯化挂柱的过程中断掉怎么解决
图片1.png


求助!GST tag在纯化挂柱的过程中断掉怎么解决-1
微信图片_20190107172850.png
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hermioner

银虫 (小有名气)

自己顶一下,还想顺便问一下linker怎么排查有没有问题。有什么方法吗
2楼2019-01-14 18:47:24
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jiaq_0101

金虫 (著名写手)

前面是过柱之前的样品吗?没有原始产物条带呀?蛋白降解了?调整过柱的条件吧

发自小木虫IOS客户端
3楼2019-01-18 13:20:51
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hermioner

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jiaq_0101 at 2019-01-18 13:20:51
前面是过柱之前的样品吗?没有原始产物条带呀?蛋白降解了?调整过柱的条件吧

marker后面的第一个泳道是 超声后的样品,第二个泳道是上样流穿液,第三个是用buffer洗杂后的流穿,后面的泳道都是用Elution buffer洗下来的条带。是不是我的表达就有问题啊?我尝试过很多过柱条件
4楼2019-01-19 16:51:23
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jiaq_0101

金虫 (著名写手)

如果是蛋白过柱降解分开了,原始样本就应该有大团的蛋白,你的表达产物就没有你的目的蛋白呀

发自小木虫IOS客户端
5楼2019-01-19 19:02:52
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阿兹尔z

铜虫 (正式写手)

6楼2019-07-31 10:54:21
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谁请我喝奶茶

新虫 (初入文坛)

请问你的蛋白最后提出来了吗

发自小木虫IOS客户端
7楼2022-06-19 20:55:22
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heylixing

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

蛋白酶抑制剂需要使用。罗氏,Merck有混合的蛋白酶抑制剂。也可以买几种自己混合使用,AEBSF, Pepstatin, Leupeptin..

注意低温操作,破碎,离心,纯化。

注意发酵下来的菌体尽快收集冻起来。
狗血的对白,重演了无数次的桥段。
8楼2022-06-23 15:08:12
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