| 查看: 1623 | 回复: 10 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
sdjnyxn123银虫 (小有名气)
|
[求助]
请问为什么测序对了的重组质粒，双酶能切出其他条带 已有4人参与
|
||
|
做表达做了快一年了一直没有表达出来，心里快急死了··· 是一个pet30与目的基因的重组质粒，目的基因117bp，总共只有11kDa大小的氨基酸，尝试了多次诱导表达都不成功 测序没有问题（只测了T7启动子后的序列，加上插入的目的基因序列，跟给出的pet30序列图是完全相同的，翻译成氨基酸理论上也可以正常表达） 目前在找问题，发现酶切这个地方一直有问题没有解决  这个是提取的质粒的照片 之后将此质粒转化入其他BL21和DH5a，测序也都正确；  这个是将此质粒进行双酶切的电泳照片 请问为什么在1000多和3000多的地方也有条带呢？ 按理说商业质粒不应该会有其他部位能切开的吧？请问这是什么原因呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有223人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 【TAIL-PCR】分析结果详述
已经有4人回复
- qPCR绝对定量荧光PCR中做标准质粒获得
已经有4人回复
- 构建基因文库的方法筛选到阳性克隆，克隆中插入的基因长为8000bp，如何找到目的基因？
已经有17人回复
- 大家看这对甲基化BSP引物设计有什么问题？
已经有3人回复
- 关于重组质粒
已经有5人回复
- 正向测序测成功，反向却测失败是什么原因？
已经有6人回复
- 请问在大肠杆菌中表达蛋白时会不会只表达一段目的蛋白？怎么解决呢？求高人指点
已经有12人回复
- 诱导不表达
已经有11人回复
- KOD和Taq酶的PCR产物为什么不一样？请各位高手指点一下！
已经有6人回复
- 求指导！！酵母的IGS1和IGS2段序列
已经有1人回复
- 关于基因测序引物的设计
已经有7人回复
- PCR后双链在变性胶上打不开
已经有0人回复
- 【求助】急~~测序发现在引物位置发现一个碱基缺失
已经有15人回复
- 【求助】用cDNA的ORF序列以基因组DNA为模板 做PCR 为何P不出其对应的基因组序列?
已经有8人回复
- 定量的若干问题，求解答！
已经有9人回复
- 请教各位做植物转基因的虫子-关于PCR引物设计
已经有1人回复
- 【求助/交流】如何确定未知基因编码氨基酸～
已经有8人回复
- 【转帖】看到个有趣的帖子转过来了
已经有3人回复
|
我前面也出现过这种情况，有可能像前面几位虫友说的一样，你的质粒在提取过程中存在问题，而你在双酶切时，酶的活性不好，所以出现这样的问题，你可以重提一次质粒，重新买两管酶试试，现在已经有快速酶切的酶了，可以试试 发自小木虫IOS客户端 |
9楼2015-12-28 08:42:38
liuxinyueer
木虫 (正式写手)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 2427.9
- 红花: 5
- 帖子: 462
- 在线: 93.5小时
- 虫号: 3364530
- 注册: 2014-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
2楼2015-12-26 20:32:25
科学小覃
木虫 (正式写手)
- 应助: 43 (小学生)
- 金币: 2426.9
- 散金: 100
- 红花: 8
- 帖子: 725
- 在线: 86.1小时
- 虫号: 3126634
- 注册: 2014-04-10
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2015-12-26 20:47:55
siriusxuan
木虫 (正式写手)
- 应助: 50 (小学生)
- 金币: 1830
- 散金: 207
- 红花: 7
- 帖子: 509
- 在线: 151.5小时
- 虫号: 1992629
- 注册: 2012-09-11
- 专业: 生物化学
4楼2015-12-27 11:36:40
