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yuuli

新虫 (初入文坛)

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专业: 微生物生理与生物化学

[求助] 求指导！！酵母的IGS1和IGS2段序列

请问有人对酵母的IGS1和IGS2段序列测序过么？为什么我扩增不出来啊？？？好不容易可以看到亮带，都是只有100bp左右的，完全不能测啊…………每个我都用过两对引物，各种PCR体系试过了（IGS1段试过CNL12和CNS1，26SF和5SR；IGS2段试过NTS2和ETS，invSR1R和5SRNAR），都是从各种文献上看的……
请问有人知道我到底是哪里有问题么？是引物（到底该选哪种啊？）还是反应条件（这个我真的试过好多遍），要么PCR后完全没有亮带，要么只有100bp左右的模糊亮带（换PCR温度只会使其亮一些或者暗一些，都是没有办法测序的）？？？
由于我们实验室只有细菌DNA提取试剂盒，所以我提DNA的时候用的是细菌，但是既然将DNA提出来了就都是DNA了吧，会是这个原因么？但是之前用同样的DNA产物做18s和26s都很正常的啊？