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yuuli

新虫 (初入文坛)

[求助] 求指导!!酵母的IGS1和IGS2段序列

请问有人对酵母的IGS1和IGS2段序列测序过么?为什么我扩增不出来啊???好不容易可以看到亮带,都是只有100bp左右的,完全不能测啊…………每个我都用过两对引物,各种PCR体系试过了(IGS1段试过CNL12和CNS1,26SF和5SR;IGS2段试过NTS2和ETS,invSR1R和5SRNAR),都是从各种文献上看的……
请问有人知道我到底是哪里有问题么?是引物(到底该选哪种啊?)还是反应条件(这个我真的试过好多遍),要么PCR后完全没有亮带,要么只有100bp左右的模糊亮带(换PCR温度只会使其亮一些或者暗一些,都是没有办法测序的)???
由于我们实验室只有细菌DNA提取试剂盒,所以我提DNA的时候用的是细菌,但是既然将DNA提出来了就都是DNA了吧,会是这个原因么?但是之前用同样的DNA产物做18s和26s都很正常的啊?
有人做过么????help~~~~万分感谢!!!!!

[ Last edited by yuuli on 2013-4-7 at 21:43 ]
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东方亦雪

铁虫 (初入文坛)

请问你问题解决了吗?我扩增丝状真菌的,采用文献报道的引物出现同样的问题,求指导!
2楼2015-09-02 08:42:03
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