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sdjnyxn123银虫 (小有名气)
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[求助]
请问为什么测序对了的重组质粒，双酶能切出其他条带 已有4人参与
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做表达做了快一年了一直没有表达出来，心里快急死了··· 是一个pet30与目的基因的重组质粒，目的基因117bp，总共只有11kDa大小的氨基酸，尝试了多次诱导表达都不成功 测序没有问题（只测了T7启动子后的序列，加上插入的目的基因序列，跟给出的pet30序列图是完全相同的，翻译成氨基酸理论上也可以正常表达） 目前在找问题，发现酶切这个地方一直有问题没有解决  这个是提取的质粒的照片 之后将此质粒转化入其他BL21和DH5a，测序也都正确；  这个是将此质粒进行双酶切的电泳照片 请问为什么在1000多和3000多的地方也有条带呢？ 按理说商业质粒不应该会有其他部位能切开的吧？请问这是什么原因呢？ |
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我前面也出现过这种情况，有可能像前面几位虫友说的一样，你的质粒在提取过程中存在问题，而你在双酶切时，酶的活性不好，所以出现这样的问题，你可以重提一次质粒，重新买两管酶试试，现在已经有快速酶切的酶了，可以试试 发自小木虫IOS客户端 |
9楼2015-12-28 08:42:38