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sdjnyxn123

银虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 18.8
帖子: 82
在线: 83.3小时
虫号: 3096694
注册: 2014-03-28
性别: GG
专业: 微生物资源与分类学

[求助] 请问为什么测序对了的重组质粒，双酶能切出其他条带已有4人参与

做表达做了快一年了一直没有表达出来，心里快急死了···

是一个pet30与目的基因的重组质粒，目的基因117bp，总共只有11kDa大小的氨基酸，尝试了多次诱导表达都不成功

测序没有问题（只测了T7启动子后的序列，加上插入的目的基因序列，跟给出的pet30序列图是完全相同的，翻译成氨基酸理论上也可以正常表达）

目前在找问题，发现酶切这个地方一直有问题没有解决

请问为什么测序对了的重组质粒，双酶能切出其他条带

这个是提取的质粒的照片
之后将此质粒转化入其他BL21和DH5a，测序也都正确；

请问为什么测序对了的重组质粒，双酶能切出其他条带-1

这个是将此质粒进行双酶切的电泳照片
请问为什么在1000多和3000多的地方也有条带呢？
按理说商业质粒不应该会有其他部位能切开的吧？请问这是什么原因呢？

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1楼 2015-12-25 10:30:24

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yoxue

木虫 (正式写手)

应助: 2 (幼儿园)
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专业: 基因组学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

质粒双酶切的目的片段太小，因此质量就低，在电泳后带浅或看不清（或看不到）是很正常的

发自小木虫Android客户端

5楼2015-12-27 13:31:34

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

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