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18273176704

新虫 (初入文坛)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 30.3
散金: 3
红花: 4
帖子: 43
在线: 12.7小时
虫号: 4157749
注册: 2015-10-19
性别: MM
专业: 水产生物遗传育种学

[求助] pcr有带，总是不亮，，，什么原因？？已有7人参与

做得普通pcr
2xEasy  MIX    10ul
引物1          1ul
  引物2          1ul
模板DNA       1ul
      水          7ul
20ul  体系    做了温度梯度。。。50.52.54.56.58.    50.52.54.  都有两条带。。56.58 有一条可是太暗。。。
循环是35个
之前也做过。。20ul亮，，，50ul  就不亮。。。再重复20ul 又不一样了。。也是暗。。为什么有带就是不亮

。。。请求大神们指教。。。

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铭记那些不可回首。。。相信自己。。。

1楼2015-11-12 20:27:18

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18273176704

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

5楼: Originally posted by mascotte at 2015-11-13 04:59:21
楼主未说明模板是基因组DNA，质粒DNA，还是反转录cDNA，设计好的引物要和NCBI相应的DNA，mRNA数据库进行比对，质粒DNA要自己用软件去比对质粒序列（含插入序列）和引物序列的配合度。
如果是质粒DNA模板，可能是引 ...

这是重设的第四队引物了。。。模板是反转录的dna,关键是带不亮，第一次的结果。。再做就重复不出来额。。做的结果根本统计不出来到底什么问题。。比如第一次我加模板dna1ul是没稀释过得，，有两条带。。还亮点。第二次再同样的条件。。就没带了。。因为师兄用没稀释的dna做出来了。。到我这就不行了。。就是带不亮。。