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18273176704

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr有带,总是不亮,,,什么原因?? 已有7人参与

做得普通pcr
2xEasy  MIX     10ul
   引物1            1ul
  引物2             1ul
   模板DNA        1ul
         水             7ul
20ul  体系       做了温度梯度。。。50.52.54.56.58.       50.52.54.  都有两条带。。56.58   有一条可是太暗。。。
循环是35个
之前也做过。。20ul亮,,,50ul  就不亮。。。再重复20ul   又不一样了。。也是暗。。为什么有带就是不亮。。。请求大神们指教。。。
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铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
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18273176704

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by mascotte at 2015-11-13 04:59:21
楼主未说明模板是基因组DNA,质粒DNA,还是反转录cDNA,设计好的引物要和NCBI相应的DNA,mRNA数据库进行比对,质粒DNA要自己用软件去比对质粒序列(含插入序列)和引物序列的配合度。
如果是质粒DNA模板,可能是引 ...

这是重设的第四队引物了。。。模板是反转录的dna,关键是带不亮,第一次的结果。。再做就重复不出来额。。做的结果根本统计不出来到底什么问题。。比如第一次我加模板dna1ul是没稀释过得,,有两条带。。还亮点 。第二次再同样的条件。。就没带了。。因为师兄用没稀释的dna做出来了。。到我这就不行了。。就是带不亮。。
铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
7楼2015-11-13 15:04:11
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鱼yao

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-11-12 21:49:32
可能是因为退火温度就是在52度左右,56、58度温度太高,所以条带不亮
人都一样
2楼2015-11-12 21:26:07
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18273176704

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 鱼yao at 2015-11-12 21:26:07
可能是因为退火温度就是在52度左右,56、58度温度太高,所以条带不亮

不是温度问题。。同样的温度20ul亮,50ul不亮,后来重做20ul也不亮了。。
铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
3楼2015-11-12 21:44:15
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534720018

至尊木虫 (著名写手)

4楼2015-11-12 22:04:25
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