| 查看: 1004 | 回复: 1 | ||
[求助]
荧光定量PCR引物的选择
|
|
植物细胞提取RNA反转后用自己设计的引物做PCR，准备摸好条件测序确定为目的基因后交给其他公司做荧光定量， 现在遇到的问题是： 1.扩增目的片段为100bp，总是有比100bp大的其他非特异片段干扰，我该如何优化条件？ 2.我的样本有两种，一种是经过光照，另一种为不经光照，用同样的条件同样的引物扩增同一个基因，但是亮度却不一样，比如都是同一个基因，同一对儿引物结果他俩的退火温度却不太一致，一个样本退火温度为64度是条带很亮，而另个样本却在50多度条带很亮，64度反而不亮，这是正常的吗？如图左面数第五个孔就是光照样本64度扩增的，同样的条件左面数最后一个孔就是不经光照64度扩增的，条带就不亮，我做定量究竟应该选哪个温度呢？ 3.另外我该选择什么样的PCR条件才能保证定量结果的准确性？比如条带单一，扩增的很亮？还是不需要很亮，只需要扩增出条带就可以了？  20150702-4.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
替拉扎明为缺氧选择性细胞毒药物研究提供新思路
已经有0人回复
-
拉坦前列腺素(Latanoprost)：前列腺素F2α衍生物如何成为青光眼一线用药
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有286人回复
-
卟啉家族中的明星分子：MESO-四(3,5-二溴-4-羟基苯基)卟啉的性质与制备
已经有1人回复
-
宠物寄生虫防治：氟雷拉纳阻断GABA受体，持效12周驱杀跳蚤蜱虫
已经有0人回复
-
为呼吸打开通道：依伐卡托的科学之旅
已经有1人回复
-
Dordaviprone（ONC201）：小分子药物在中线胶质瘤中的应用
已经有0人回复
-
依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展
已经有1人回复
-
膀胱癌靶向治疗新选择：厄达替尼作用机制与耐药研究进展
已经有0人回复
-
从水母到实验室：腔肠素的发现历程与生物发光奥秘
已经有1人回复
-
线粒体氧化磷酸化的新靶点：S-Gboxin的发现与研究进展
已经有0人回复
2楼2015-07-23 11:06:12
5