| 查看: 958 | 回复: 1 | ||
[求助]
荧光定量PCR引物的选择
|
|
植物细胞提取RNA反转后用自己设计的引物做PCR，准备摸好条件测序确定为目的基因后交给其他公司做荧光定量， 现在遇到的问题是： 1.扩增目的片段为100bp，总是有比100bp大的其他非特异片段干扰，我该如何优化条件？ 2.我的样本有两种，一种是经过光照，另一种为不经光照，用同样的条件同样的引物扩增同一个基因，但是亮度却不一样，比如都是同一个基因，同一对儿引物结果他俩的退火温度却不太一致，一个样本退火温度为64度是条带很亮，而另个样本却在50多度条带很亮，64度反而不亮，这是正常的吗？如图左面数第五个孔就是光照样本64度扩增的，同样的条件左面数最后一个孔就是不经光照64度扩增的，条带就不亮，我做定量究竟应该选哪个温度呢？ 3.另外我该选择什么样的PCR条件才能保证定量结果的准确性？比如条带单一，扩增的很亮？还是不需要很亮，只需要扩增出条带就可以了？  20150702-4.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有176人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
2楼2015-07-23 11:06:12