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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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kkkkk76

新虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增不出目的条带,求分析原因 已有3人参与

我想要扩增的目的条带是500多和600多的,但是不能扩增出目的条带,用的是病毒作为模板,每次都能扩增出1000-2000的非特异性条带(是每次。。。),接近2000了,然后对引物浓度和退火温度都摸索过条件,还是不能得到想要的条带,不考虑引物问题的话,各位大神有什么好的建议吗?对了,我的延伸时间是45s,就很奇怪能扩增出这么长的非特异性条带
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咖啡豆G

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
8楼: Originally posted by kkkkk76 at 2015-11-03 19:16:30
污染指的是模板污染吗?前后换了有3、4个模板了,师兄师姐也都用这些模板扩增出其他基因...

不能确定什么有污染,比如引物、模板、buffer,都有可能,不行就做几个阳性和阴性对照吧
9楼2015-11-03 21:47:52
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kkkkk76

新虫 (小有名气)

补充下,模板也换过几次实验室使用过的模板
2楼2015-11-03 11:11:22
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

用的什么酶呢?有的酶扩增速率很快的。
3楼2015-11-03 12:57:40
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足下客

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是扩病毒DNA还是RNA?用试剂盒抽提的吗?PCR反应条件是怎样的?用的是什么Taq酶?
4楼2015-11-03 13:08:00
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