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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩增不出目的条带，求分析原因
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kkkkk76

新虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增不出目的条带，求分析原因 已有3人参与

我想要扩增的目的条带是500多和600多的，但是不能扩增出目的条带，用的是病毒作为模板，每次都能扩增出1000-2000的非特异性条带（是每次。。。），接近2000了，然后对引物浓度和退火温度都摸索过条件，还是不能得到想要的条带，不考虑引物问题的话，各位大神有什么好的建议吗？对了，我的延伸时间是45s，就很奇怪能扩增出这么长的非特异性条带
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1楼 2015-11-03 11:10:14
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咖啡豆G

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
8楼: Originally posted by kkkkk76 at 2015-11-03 19:16:30
污染指的是模板污染吗？前后换了有3、4个模板了，师兄师姐也都用这些模板扩增出其他基因...

不能确定什么有污染，比如引物、模板、buffer，都有可能，不行就做几个阳性和阴性对照吧
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9楼2015-11-03 21:47:52
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kkkkk76

新虫 (小有名气)
补充下，模板也换过几次实验室使用过的模板
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2楼2015-11-03 11:11:22
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
用的什么酶呢？有的酶扩增速率很快的。
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3楼2015-11-03 12:57:40
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足下客

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是扩病毒DNA还是RNA？用试剂盒抽提的吗？PCR反应条件是怎样的？用的是什么Taq酶？
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4楼2015-11-03 13:08:00
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