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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒的测序引物
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天下骡子一家

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒的测序引物 已有3人参与

本人刚刚接触接触分子不久，会的东西不多，还请各位赐教，

最近用psiCHECK-2插入一段目标片段（890bp）构建了一个质粒，准备送去测序，但发现还是有很多不太了解的地方，

1. 我在很多地方查了通用引物表，但是没有查到psiCHECK-2的通用引物，那么哪里能查到质粒的这种相关信息啊？
2. 若是不用通用引物，自行在多克隆位点上下游设计测序引物去测我的插入片段，需要特别注意些什么？大家一般都是如何设计的？

非常感谢各位！
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1楼 2015-09-24 18:29:09
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dorecnu

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dorecnu at 2015-09-24 13:22:44
http://www.biofeng.com/zaiti/buru/psiCHECK-2.html
质粒信息可以从上面的页面中获得，初步看了一下图谱这个质粒应该没有通用引物。鉴于以上链接已经给出了载体序列，所以可以使用primer primer 6 软件设计引物， ...

引物设计还是建议用primer primer吧，oligo是用来做引物评价的。送去测序？还是送去合成？没看懂。
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5楼2015-09-28 09:18:51
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dorecnu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
天下骡子一家: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢，用了oligo设计的引物，已经送去测序了 2015-09-26 14:43:46
http://www.biofeng.com/zaiti/buru/psiCHECK-2.html
质粒信息可以从上面的页面中获得，初步看了一下图谱这个质粒应该没有通用引物。鉴于以上链接已经给出了载体序列，所以可以使用primer primer 6 软件设计引物，由于不知道你的基因克隆到什么位置，如果是notI,pmeI,xhoI,sgfI的话，闲来无聊帮你设计了一对：F：CAACTACAACGCCTACCTT(position:1407) R: AACCCTAACCACCGCTTA(position1792) 扩增片段长386bp。
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2楼2015-09-24 20:22:44
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gxx2lm

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
目的片段怎么获得的？如果是PCR，可以就用PCR引物进行测序，也可以先将目的片段连接到克隆载体上，通用引物测序正确后再亚克隆至需要的载体上。亚克隆过程只是连接转化，一般不会发生突变。
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3楼2015-09-25 09:10:53
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zbxky

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
英格恩的博客上有很多疑难解析你可以去看看
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4楼2015-09-25 09:35:30
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