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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 测序结果回来，我不知道该怎么分析下引物测序结果
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洪闪

新虫 (初入文坛)

[求助] 测序结果回来，我不知道该怎么分析下引物测序结果 已有1人参与

小妹刚刚接触测序结果分析软件，如DNAMAN、primer 5.0、MEGA。初学者有点动不明白了。我将目的片段插入PUC18载体，转化后，挑取阳性克隆提取质粒，测序。测序结果发回来了，我不知道怎么分析了。测序用的引物是通用引物M13F和M13R双向测序。现在两个方向只测了一个反应。在M13F引物测序结果中我能够找到酶切位点（BamH Ⅰ,即在这个位置插入目的片段)附近的部分PUC18序列；但是，在M13R引物测序结果中我找不到酶切位点附近的puc18部分序列，为什么？找不到连接处，我怎么确定我的目的片段是那些碱基（我自己不知道目的片段序列碱基组成，因为目的片段是随机酶切得到的）。我在附件中添加上我的测序结果。希望明白人帮我指点一下。
万分感谢。
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    • 2012-12-02 11:36:21, 12.54 K

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1楼 2012-12-02 11:36:21
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fangkaiacer

金虫 (正式写手)
没接触过，但要顶一个。
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你知道5月5日吗？
2楼2012-12-02 22:03:26
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576142326

木虫 (正式写手)
可能是M13R引物的结合位点距离你插入片段太近了，你可以重新设计个引物，反向测个序，然后与M13f的序列连接。
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3楼2014-04-27 17:50:10
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Becky 101

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 576142326 at 2014-04-27 17:50:10
可能是M13R引物的结合位点距离你插入片段太近了，你可以重新设计个引物，反向测个序，然后与M13f的序列连接。

你好，怎么连接F 和R 的结果呢？把序列拼一起就可以啦？
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4楼2017-04-25 10:46:10
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

如果片段太长的话可以考虑测通，还有就是可能公司没有测完，只把第一个测序反应的结果发给你了，过段时间就会给你拼接结果的，有什么不明白的可以咨询测序公司
赞一下 回复此楼
···
5楼2017-04-25 10:54:23
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