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hxx593847830新虫 (小有名气)
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真菌DNA提取问题 已有5人参与
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| 最近在做真菌18S和ITS鉴定，使用液氮研磨、试剂盒提取DNA，已经做了一遍没有跑出条带。因为我是取了2ML菌液，自动研磨10min没有提取出来，猜想可能是提取DNA量少的原因。想问一下各位，试剂盒说是取真菌100mg，真菌菌液培养几天取样较好？取样的话取多少合适？另外，如果我用自动研磨机研磨多长时间好呢？希望有经验的大神指导！！ |
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 真菌 |
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renzhiq
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【答案】应助回帖
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hxx593847830: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-09-23 15:47:44
hxx593847830: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-09-23 15:47:44
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哈哈，你说的这个实验我比较熟悉。我做过，当初我也遇到过同样的问题。解决方法如下； 你可以将生长时间长的菌丝抽滤，用缓冲液漂洗后，在再用液氮碾磨 你也可以将生长短时间（菌体未老化）的菌液离心，用缓冲液漂洗后，再用液氮碾磨 如果这两种方法都不行就改用酶法破壁，效果会比较好。 到由于你是要做菌种鉴定，对基因组的质量要求不高，所以无论那种都可以 在样菌的过程中，切记要保证没有染杂菌 如果还有问题再联系我 发自小木虫Android客户端 |
9楼2015-09-18 23:47:51
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-09-15 19:12:41
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量少的原因的话直接pcr就可以了 。p不出来就不是量少的问题了。可能没有裂解开。自动研磨没用过。提DNA液氮。或者普通研磨，玻璃珠等物理方法应该都差不多。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2015-09-15 13:38:42
3楼2015-09-15 13:41:04
4楼2015-09-15 13:42:03
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