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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 真菌DNA提取问题
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hxx593847830

新虫 (小有名气)

[求助] 真菌DNA提取问题 已有5人参与

最近在做真菌18S和ITS鉴定，使用液氮研磨、试剂盒提取DNA，已经做了一遍没有跑出条带。因为我是取了2ML菌液，自动研磨10min没有提取出来，猜想可能是提取DNA量少的原因。想问一下各位，试剂盒说是取真菌100mg，真菌菌液培养几天取样较好？取样的话取多少合适？另外，如果我用自动研磨机研磨多长时间好呢？希望有经验的大神指导！！
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1楼 2015-09-15 13:24:44
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

renzhiq

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
hxx593847830: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-09-23 15:47:44
哈哈，你说的这个实验我比较熟悉。我做过，当初我也遇到过同样的问题。解决方法如下；
你可以将生长时间长的菌丝抽滤，用缓冲液漂洗后，在再用液氮碾磨
你也可以将生长短时间（菌体未老化）的菌液离心，用缓冲液漂洗后，再用液氮碾磨
如果这两种方法都不行就改用酶法破壁，效果会比较好。
到由于你是要做菌种鉴定，对基因组的质量要求不高，所以无论那种都可以
在样菌的过程中，切记要保证没有染杂菌
如果还有问题再联系我

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9楼2015-09-18 23:47:51
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酒家何处

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-09-15 19:12:41
量少的原因的话直接pcr就可以了 。p不出来就不是量少的问题了。可能没有裂解开。自动研磨没用过。提DNA液氮。或者普通研磨，玻璃珠等物理方法应该都差不多。

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2楼2015-09-15 13:38:42
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小可爱天

金虫 (小有名气)
为什么用菌液做？菌丝体做应该会有的。

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3楼2015-09-15 13:41:04
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小可爱天

金虫 (小有名气)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-09-15 19:12:48
把你养的菌抽滤，用菌丝体研磨提取做。

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4楼2015-09-15 13:42:03
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199006287956

木虫 (著名写手)
真菌细胞壁比较厚，DNA不容易出来，所谓的菌落PCR，只对于一些菌能用。

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追求不惜，奋斗不息
7楼2015-09-17 22:28:35
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周宁135139

金虫 (正式写手)
我的菌是PDA培养5天抽滤得到菌体，干燥箱烘干后用组织研磨器磨成粉末，只需30毫克就足够了。

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8楼2015-09-18 23:22:09
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普通回帖

hxx593847830

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 酒家何处 at 2015-09-15 13:38:42
量少的原因的话直接pcr就可以了 。p不出来就不是量少的问题了。可能没有裂解开。自动研磨没用过。提DNA液氮。或者普通研磨，玻璃珠等物理方法应该都差不多。

谢谢

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5楼2015-09-16 12:41:23
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hxx593847830

新虫 (小有名气)
谢谢～我想到直接做菌落PCR

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6楼2015-09-16 12:41:45
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halfbeer

捐助贵宾 (小有名气)

这是啥？

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by hxx593847830 at 2015-09-16 12:41:45
谢谢～我想到直接做菌落PCR

启动时间长点，我做酵母菌体pcr启动时间15min
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现在我们能做的就是努力努力再努力
10楼2015-09-24 15:46:30
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