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hxx593847830

新虫 (小有名气)

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[求助] 真菌DNA提取问题已有5人参与

最近在做真菌18S和ITS鉴定，使用液氮研磨、试剂盒提取DNA，已经做了一遍没有跑出条带。因为我是取了2ML菌液，自动研磨10min没有提取出来，猜想可能是提取DNA量少的原因。想问一下各位，试剂盒说是取真菌100mg，真菌菌液培养几天取样较好？取样的话取多少合适？另外，如果我用自动研磨机研磨多长时间好呢？希望有经验的大神指导！！

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1楼 2015-09-15 13:24:44

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renzhiq

木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
hxx593847830: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-09-23 15:47:44

哈哈，你说的这个实验我比较熟悉。我做过，当初我也遇到过同样的问题。解决方法如下；
你可以将生长时间长的菌丝抽滤，用缓冲液漂洗后，在再用液氮碾磨
你也可以将生长短时间（菌体未老化）的菌液离心，用缓冲液漂洗后，再用液氮碾磨
如果这两种方法都不行就改用酶法破壁，效果会比较好。
到由于你是要做菌种鉴定，对基因组的质量要求不高，所以无论那种都可以
在样菌的过程中，切记要保证没有染杂菌
如果还有问题再联系我

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