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如何提取植物内生真菌总DNA？
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各位虫友，你们好！ 我近期想做一个实验，是通过用Roche 454 FLX+平台，用真菌ITS的通用引物对真菌ITS区进行高通量测序，分别做植物根、茎、叶内生真菌多样性的研究。但现在遇到一个问题，就是在前期处理上。主要有以下几个问题： 1.表面该如何消毒，去除表面真菌的干扰？ 2.由于是用真菌ITS通用引物，担心宿主DNA会干扰实验。在提取总DNA时，怎样才能尽可能的排除宿主DNA的干扰？而又能够尽可能多的收集到内生真菌的总DNA？ 这个实验非常的急切，所以希望虫友们，能够尽快的回复，谢谢！！！ |
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kingleo99
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助 2012-12-12 21:53:11
江西南昌人: 金币+5, ★★★很有帮助, 这个答案应该很有用，值得尝试，谢谢！ 2012-12-13 21:09:47
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| 第一个问题：一般的梯度性的升汞溶液消毒就可以将表体的真菌杀死，之后做个对照实验就可以了，比如消过毒的植物体最后用无菌水清洗一下，那个水进行培养（涂到PDA平板上）。第二个问题植物内生菌基本都是手提DNA的，提取完后的DNA采用胶纯化，而内生菌总DNA大小在10k-15k左右，而植物的总DNA很大所以这样可以将内生菌总DNA纯化出来，扩增的时候就不会受干扰！ |
2楼2012-12-12 16:48:41
3楼2012-12-13 21:08:57
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