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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】氯化苄方法提取真菌DNA
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ntbp

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】氯化苄方法提取真菌DNA 已有3人参与

做了5遍了，还是提不出来，提出来的也是RNA。恳求做过的同学给我一份实验步骤，不胜感激。
另溶解DNA时双蒸水和TE溶解有何差别？多谢大家！！！
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1楼 2010-06-11 10:05:57
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yituyitu

木虫 (正式写手)
就用ctab法，我提了上千个了，没问题。。。
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2楼2010-06-11 13:46:49
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zhaopo

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以参考安徽农业大学李旻2006年的硕士论文中的DNA提取方法。我用的都是他 的方法，效果比较好
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努力一点
3楼2011-03-10 20:48:13
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zhaopo

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以使用一下的DNA提取方法：称取0.05g~0.1g冻干菌丝放入1.5ml eppendorf管中，加入300ml抽取液（100mMTris.HCl,pH 9.0；40mM EDTA，pH 8.0），充分振荡混匀后加入100ml 10％SDS、300ml氯化苄。振荡混匀后放入50℃水浴1小时，每隔10分钟振荡混合一次。加入300ul NaAC（pH 5.2）混匀，冰浴15分钟，4℃下6000rpm离心15分钟。离心完成后取出吸取上清液至一新eppendorf管中，加入5ul 10mg/ul RNA酶后放于37℃水浴保温1小时。加入等体积酚氯仿异戊醇（25:24:1），反复振荡混匀后12000g离心10分钟，结束后取出吸取上清液至一新管中，重复此步骤一次。向取出的上清液中加入氯仿异戊醇，反复振荡后12000g离心10分钟，吸出上清液，重复此步骤一次。向上清液中加入1/10体积3M NaAC，再加入等体积冷异戊醇，轻轻上下转动，放入4℃冰箱20分钟或者过夜，使DNA能够充分沉淀。12000g离心15分钟，取出倒去液体，将沉淀用80％冷乙醇漂洗两次，空干15分钟后溶于100ul TE溶液中。溶液保存于－20℃备用。
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努力一点
4楼2011-03-10 20:51:49
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强悍的阿Q

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
同学你的氯化苄方法提出来了吗？ 我的很模糊，可是文献上别人的很亮。
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5楼2014-05-26 21:35:02
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