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【求助/交流】氯化苄方法提取真菌DNA 已有3人参与
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做了5遍了，还是提不出来，提出来的也是RNA。恳求做过的同学给我一份实验步骤，不胜感激。 另溶解DNA时双蒸水和TE溶解有何差别？多谢大家！！！ |
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yituyitu
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| 可以使用一下的DNA提取方法：称取0.05g~0.1g冻干菌丝放入1.5ml eppendorf管中，加入300ml抽取液（100mMTris.HCl,pH 9.0；40mM EDTA，pH 8.0），充分振荡混匀后加入100ml 10％SDS、300ml氯化苄。振荡混匀后放入50℃水浴1小时，每隔10分钟振荡混合一次。加入300ul NaAC（pH 5.2）混匀，冰浴15分钟，4℃下6000rpm离心15分钟。离心完成后取出吸取上清液至一新eppendorf管中，加入5ul 10mg/ul RNA酶后放于37℃水浴保温1小时。加入等体积酚氯仿异戊醇（25:24:1），反复振荡混匀后12000g离心10分钟，结束后取出吸取上清液至一新管中，重复此步骤一次。向取出的上清液中加入氯仿异戊醇，反复振荡后12000g离心10分钟，吸出上清液，重复此步骤一次。向上清液中加入1/10体积3M NaAC，再加入等体积冷异戊醇，轻轻上下转动，放入4℃冰箱20分钟或者过夜，使DNA能够充分沉淀。12000g离心15分钟，取出倒去液体，将沉淀用80％冷乙醇漂洗两次，空干15分钟后溶于100ul TE溶液中。溶液保存于－20℃备用。 |
4楼2011-03-10 20:51:49
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