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suyinling

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】真菌提DNA的方法已有8人参与

除了研磨菌丝,有没有简便的方法,例如孢子液
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acnotlove

银虫 (小有名气)

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dhd997(金币+3):good 2010-11-09 17:02:50
CTAB法提取步骤:
(1) 在7mL离心管中加入65℃预热的抽提液2.5mL。
(2) 加入1g样品液氮研磨,加入巯基乙醇50μL,上下震荡,使蛋白质变性沉淀, 65℃水浴1h,每隔10min颠倒混匀一次。
(3) 加入等体积(约3mL)的氯仿/异戊醇(24/1)混匀,除去蛋白质,4℃平衡离心,10000rpm,10min。
(4) 取上清(约2.5mL)到7mL管,加1/5体积(约0.5mL)65℃预热的CTAB/NaCl混匀,加入2mL的氯仿/异戊醇(24/1)混匀,4℃平衡离心,10000rpm,10min。
(5) 取上清,加等体积(约3mL)的CTAB沉淀液,颠倒混匀。65℃水浴30min至沉淀可见。4℃平衡离心,10000 rpm,10min后小心去上清。
(6) 沉淀用TE(0.5mL)溶解,加入等体积(约0.5mL)的酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)抽提,4℃平衡离心,10000rpm,10min。
(7) 取上清加入2倍体积的无水乙醇(1mL),再加入1/10体积的NaAC (pH 5.2)约0.1mL。
(8) -20℃冰箱1h,4℃平衡离心,12000rpm,10min,弃上清,用70%酒精清洗2次,滤纸吸去多余水分,超净台吹干。
(9) 0.05mL TE溶解,-20℃保存。
2楼2010-11-09 14:31:43
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wwllkkhh

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以从一个真菌孢子中提取到DNA 吗?
牛~逼~哄~哄
3楼2010-11-29 16:47:36
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646800558

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wwllkkhh at 2010-11-29 16:47:36:
可以从一个真菌孢子中提取到DNA 吗?

可以,但是需要大量的孢子,否则跑电泳后条带不明显,即提取出的DNA含量较低
4楼2010-11-29 17:10:06
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leehh071

铜虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-14 14:20:51
我个人觉得SDS方法比较好,收集菌丝后加入钢珠,加入抽提液等,在涡旋仪上振荡,……,也能提取出不错的DNA。
5楼2011-01-14 09:40:24
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
CTAB、SDS法提都可以,我都提过,质量很好
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
6楼2011-01-14 11:52:37
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-14 14:20:59
加玻璃珠+酚:氯仿:异戊醇,震荡五-十分钟 效果也不错
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
7楼2011-01-14 12:50:04
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wqj1988926

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以试试直接用真菌做pcr,我用细菌试过。
风雪夜归人
8楼2011-01-14 16:47:26
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zml2006009

木虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
对于部分细胞壁不太厚、致密的菌,可以用微波破壁提起法,自己找找文献看看。
9楼2011-01-15 17:01:23
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