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suyinling

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】真菌提DNA的方法 已有8人参与

除了研磨菌丝，有没有简便的方法，例如孢子液
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1楼 2010-11-09 14:28:42
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acnotlove

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+3):good 2010-11-09 17:02:50
CTAB法提取步骤：
(1) 在7mL离心管中加入65℃预热的抽提液2.5mL。
(2) 加入1g样品液氮研磨，加入巯基乙醇50μL，上下震荡，使蛋白质变性沉淀， 65℃水浴1h，每隔10min颠倒混匀一次。
(3) 加入等体积（约3mL）的氯仿/异戊醇(24/1)混匀，除去蛋白质，4℃平衡离心，10000rpm，10min。
(4) 取上清（约2.5mL）到7mL管，加1/5体积（约0.5mL）65℃预热的CTAB/NaCl混匀，加入2mL的氯仿/异戊醇(24/1)混匀，4℃平衡离心，10000rpm，10min。
(5) 取上清，加等体积（约3mL）的CTAB沉淀液，颠倒混匀。65℃水浴30min至沉淀可见。4℃平衡离心，10000 rpm，10min后小心去上清。
(6) 沉淀用TE（0.5mL）溶解，加入等体积（约0.5mL）的酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)抽提，4℃平衡离心，10000rpm，10min。
(7) 取上清加入2倍体积的无水乙醇（1mL），再加入1/10体积的NaAC （pH 5.2）约0.1mL。
(8) -20℃冰箱1h，4℃平衡离心，12000rpm，10min，弃上清，用70%酒精清洗2次，滤纸吸去多余水分，超净台吹干。
(9) 0.05mL TE溶解，-20℃保存。
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2楼2010-11-09 14:31:43
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wwllkkhh

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以从一个真菌孢子中提取到DNA 吗？
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牛~逼~哄~哄
3楼2010-11-29 16:47:36
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646800558

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wwllkkhh at 2010-11-29 16:47:36:
可以从一个真菌孢子中提取到DNA 吗？

可以，但是需要大量的孢子，否则跑电泳后条带不明显，即提取出的DNA含量较低
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4楼2010-11-29 17:10:06
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leehh071

铜虫 (小有名气)
★ ★
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rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-14 14:20:51
我个人觉得SDS方法比较好，收集菌丝后加入钢珠，加入抽提液等，在涡旋仪上振荡，……，也能提取出不错的DNA。
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5楼2011-01-14 09:40:24
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
CTAB、SDS法提都可以，我都提过，质量很好
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
6楼2011-01-14 11:52:37
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★
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rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-14 14:20:59
加玻璃珠+酚：氯仿：异戊醇，震荡五-十分钟 效果也不错
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
7楼2011-01-14 12:50:04
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
★
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可以试试直接用真菌做pcr，我用细菌试过。
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风雪夜归人
8楼2011-01-14 16:47:26
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zml2006009

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
对于部分细胞壁不太厚、致密的菌，可以用微波破壁提起法，自己找找文献看看。
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9楼2011-01-15 17:01:23
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