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suyinling

木虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 5152.5
散金: 65
沙发: 1
帖子: 813
在线: 240.4小时
虫号: 1085385
注册: 2010-08-31
性别: MM
专业: 蔬菜学与瓜果学

[交流] 【求助/交流】真菌提DNA的方法已有8人参与

除了研磨菌丝，有没有简便的方法，例如孢子液

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1楼2010-11-09 14:28:42

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wqj1988926

金虫 (正式写手)

应助: 40 (小学生)
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帖子: 929
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注册: 2010-11-27
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

可以试试直接用真菌做pcr，我用细菌试过。

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风雪夜归人

8楼2011-01-14 16:47:26

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acnotlove

银虫 (小有名气)

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红花: 1
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在线: 6.6小时
虫号: 71124
注册: 2005-05-29
性别: GG

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+3):good 2010-11-09 17:02:50

CTAB法提取步骤：
(1) 在7mL离心管中加入65℃预热的抽提液2.5mL。
(2) 加入1g样品液氮研磨，加入巯基乙醇50μL，上下震荡，使蛋白质变性沉淀， 65℃水浴1h，每隔10min颠倒混匀一次。
(3) 加入等体积（约3mL）的氯仿/异戊醇(24/1)混匀，除去蛋白质，4℃平衡离心，10000rpm，10min。
(4) 取上清（约2.5mL）到7mL管，加1/5体积（约0.5mL）65℃预热的CTAB/NaCl混匀，加入2mL的氯仿/异戊醇(24/1)混匀，4℃平衡离心，10000rpm，10min。
(5) 取上清，加等体积（约3mL）的CTAB沉淀液，颠倒混匀。65℃水浴30min至沉淀可见。4℃平衡离心，10000 rpm，10min后小心去上清。
(6) 沉淀用TE（0.5mL）溶解，加入等体积（约0.5mL）的酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)抽提，4℃平衡离心，10000rpm，10min。
(7) 取上清加入2倍体积的无水乙醇（1mL），再加入1/10体积的NaAC （pH 5.2）约0.1mL。
(8) -20℃冰箱1h，4℃平衡离心，12000rpm，10min，弃上清，用70%酒精清洗2次，滤纸吸去多余水分，超净台吹干。
(9) 0.05mL TE溶解，-20℃保存。

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2楼2010-11-09 14:31:43

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