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suyinling木虫 (正式写手)
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【求助/交流】真菌提DNA的方法 已有8人参与
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| 除了研磨菌丝，有没有简便的方法，例如孢子液 |
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 土壤真菌 |
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fungixx
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7楼2011-01-14 12:50:04
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+3):good 2010-11-09 17:02:50
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CTAB法提取步骤： (1) 在7mL离心管中加入65℃预热的抽提液2.5mL。 (2) 加入1g样品液氮研磨，加入巯基乙醇50μL，上下震荡，使蛋白质变性沉淀， 65℃水浴1h，每隔10min颠倒混匀一次。 (3) 加入等体积（约3mL）的氯仿/异戊醇(24/1)混匀，除去蛋白质，4℃平衡离心，10000rpm，10min。 (4) 取上清（约2.5mL）到7mL管，加1/5体积（约0.5mL）65℃预热的CTAB/NaCl混匀，加入2mL的氯仿/异戊醇(24/1)混匀，4℃平衡离心，10000rpm，10min。 (5) 取上清，加等体积（约3mL）的CTAB沉淀液，颠倒混匀。65℃水浴30min至沉淀可见。4℃平衡离心，10000 rpm，10min后小心去上清。 (6) 沉淀用TE（0.5mL）溶解，加入等体积（约0.5mL）的酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)抽提，4℃平衡离心，10000rpm，10min。 (7) 取上清加入2倍体积的无水乙醇（1mL），再加入1/10体积的NaAC （pH 5.2）约0.1mL。 (8) -20℃冰箱1h，4℃平衡离心，12000rpm，10min，弃上清，用70%酒精清洗2次，滤纸吸去多余水分，超净台吹干。 (9) 0.05mL TE溶解，-20℃保存。 |
2楼2010-11-09 14:31:43
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3楼2010-11-29 16:47:36
646800558
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4楼2010-11-29 17:10:06
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