24小时热门版块排行榜    

查看: 2523  |  回复: 10

王之御魂

木虫 (小有名气)

[求助] 真菌菌丝体提取DNA问题

最近在提真菌的DNA准备测序,提了几次DNA纯度可以,PCR后条带单一,但是送了3次样都测不出结果,想请教前辈们大概选取什么时候的菌丝体来提DNA最好?我在做的这真菌一般第二天摇瓶中就形成很多菌丝体(一般在培养第四、五天收集菌丝体提DNA)
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王之御魂

木虫 (小有名气)

是不是菌丝体长过头了
2楼2013-10-09 08:00:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

任_强

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
王之御魂: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-10-09 08:38:28
一般选择菌体生长旺盛的时期,也就是指数生长期。你选四五天的可能有些晚。但你说你纯度可以、PCR条带单一,应该是提出来了。应该不是菌龄的问题吧。你再好好找找其他的原因。
微生物行业的初学者,望大牛们不吝赐教
3楼2013-10-09 08:18:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王之御魂

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 任_强 at 2013-10-09 08:18:17
一般选择菌体生长旺盛的时期,也就是指数生长期。你选四五天的可能有些晚。但你说你纯度可以、PCR条带单一,应该是提出来了。应该不是菌龄的问题吧。你再好好找找其他的原因。

我看了下过滤收集菌丝体用的纱布和冲洗的蒸馏水都要无菌处理,这些影响大吗?
4楼2013-10-09 08:39:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

任_强

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
王之御魂: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-10-14 09:17:08
做实验就要按照实验要求去做,不然你不知道哪一步出错。我提真菌RNA的时候取出来的菌体进行过滤和洗涤时也没考虑杂菌的污染问题。不过现在想起来,觉得这个问题挺严重的。如果在提出的菌体中混有杂菌,你不就相当于把杂菌的DNA也提出来了吗?
微生物行业的初学者,望大牛们不吝赐教
5楼2013-10-09 09:55:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王之御魂

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 任_强 at 2013-10-09 09:55:44
做实验就要按照实验要求去做,不然你不知道哪一步出错。我提真菌RNA的时候取出来的菌体进行过滤和洗涤时也没考虑杂菌的污染问题。不过现在想起来,觉得这个问题挺严重的。如果在提出的菌体中混有杂菌,你不就相当于 ...

请教下液氮研磨一般要磨多少分钟,我感觉磨的久点提出来DNA的纯度就会高点
6楼2013-10-09 10:28:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

phoenix211

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
王之御魂: 金币+1, 有帮助 2013-10-10 08:57:54
以前提过木霉的DNA 没有用液氮研磨  用了玻璃珠  效果挺好的  
既然PCR都做出来了  测序没结果  是不是扩增产物不纯?
7楼2013-10-09 16:03:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

任_强

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 王之御魂 at 2013-10-09 10:28:27
请教下液氮研磨一般要磨多少分钟,我感觉磨的久点提出来DNA的纯度就会高点...

具体时间不好说,一般把菌磨碎了就可以。液氮低温瞬间冷冻菌体后,再碾压成粉末。
微生物行业的初学者,望大牛们不吝赐教
8楼2013-10-09 18:33:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张小逸

铜虫 (小有名气)

请问提菌丝DNA可以用什么类型的试剂盒?
9楼2013-10-25 10:55:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王之御魂

木虫 (小有名气)

我用上海生工的Ezup柱式真菌基因DNA组抽提试剂盒,效果还行
10楼2013-10-28 10:10:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 王之御魂 的主题更新
信息提示
请填处理意见