24小时热门版块排行榜    

查看: 2692  |  回复: 10

王之御魂

木虫 (小有名气)

[求助] 真菌菌丝体提取DNA问题

最近在提真菌的DNA准备测序,提了几次DNA纯度可以,PCR后条带单一,但是送了3次样都测不出结果,想请教前辈们大概选取什么时候的菌丝体来提DNA最好?我在做的这真菌一般第二天摇瓶中就形成很多菌丝体(一般在培养第四、五天收集菌丝体提DNA)
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王之御魂

木虫 (小有名气)

是不是菌丝体长过头了
2楼2013-10-09 08:00:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

任_强

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
王之御魂: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-10-09 08:38:28
一般选择菌体生长旺盛的时期,也就是指数生长期。你选四五天的可能有些晚。但你说你纯度可以、PCR条带单一,应该是提出来了。应该不是菌龄的问题吧。你再好好找找其他的原因。
微生物行业的初学者,望大牛们不吝赐教
3楼2013-10-09 08:18:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王之御魂

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 任_强 at 2013-10-09 08:18:17
一般选择菌体生长旺盛的时期,也就是指数生长期。你选四五天的可能有些晚。但你说你纯度可以、PCR条带单一,应该是提出来了。应该不是菌龄的问题吧。你再好好找找其他的原因。

我看了下过滤收集菌丝体用的纱布和冲洗的蒸馏水都要无菌处理,这些影响大吗?
4楼2013-10-09 08:39:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

任_强

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
王之御魂: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-10-14 09:17:08
做实验就要按照实验要求去做,不然你不知道哪一步出错。我提真菌RNA的时候取出来的菌体进行过滤和洗涤时也没考虑杂菌的污染问题。不过现在想起来,觉得这个问题挺严重的。如果在提出的菌体中混有杂菌,你不就相当于把杂菌的DNA也提出来了吗?
微生物行业的初学者,望大牛们不吝赐教
5楼2013-10-09 09:55:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王之御魂

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 任_强 at 2013-10-09 09:55:44
做实验就要按照实验要求去做,不然你不知道哪一步出错。我提真菌RNA的时候取出来的菌体进行过滤和洗涤时也没考虑杂菌的污染问题。不过现在想起来,觉得这个问题挺严重的。如果在提出的菌体中混有杂菌,你不就相当于 ...

请教下液氮研磨一般要磨多少分钟,我感觉磨的久点提出来DNA的纯度就会高点
6楼2013-10-09 10:28:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

phoenix211

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
王之御魂: 金币+1, 有帮助 2013-10-10 08:57:54
以前提过木霉的DNA 没有用液氮研磨  用了玻璃珠  效果挺好的  
既然PCR都做出来了  测序没结果  是不是扩增产物不纯?
7楼2013-10-09 16:03:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

任_强

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 王之御魂 at 2013-10-09 10:28:27
请教下液氮研磨一般要磨多少分钟,我感觉磨的久点提出来DNA的纯度就会高点...

具体时间不好说,一般把菌磨碎了就可以。液氮低温瞬间冷冻菌体后,再碾压成粉末。
微生物行业的初学者,望大牛们不吝赐教
8楼2013-10-09 18:33:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张小逸

铜虫 (小有名气)

请问提菌丝DNA可以用什么类型的试剂盒?
9楼2013-10-25 10:55:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王之御魂

木虫 (小有名气)

我用上海生工的Ezup柱式真菌基因DNA组抽提试剂盒,效果还行
10楼2013-10-28 10:10:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 王之御魂 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +7 不知道叫什么! 2026-03-15 8/400 2026-03-15 20:11 by 棒棒球手
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy! 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 293求调剂 +5 上班不着吉 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:37 by JourneyLucky
[考研] 一志愿浙江大学0856材料与化工求调剂 +4 yansheng@211 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:10 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-09 4/200 2026-03-14 02:06 by tranquil_ya
[考研] 332分材料工程调剂 +3 莓好时光海苔 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:03 by JourneyLucky
[考研] 085600求调剂 +3 a邵星池 2026-03-09 3/150 2026-03-14 01:32 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +5 牛乳糖的卡卡 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:05 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 285化工学硕求调剂(081700) +6 柴郡猫_ 2026-03-12 6/300 2026-03-13 20:46 by hmn_wj
[考研] 301求调剂 +6 Liyouyumairs 2026-03-11 6/300 2026-03-13 20:11 by JourneyLucky
[硕博家园] 深圳大学硕士招生(2026秋,传感器方向,仅录取第一志愿) +4 xujiaoszu 2026-03-11 7/350 2026-03-13 17:28 by xujiaoszu
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
[考研] 化工0817调剂 +8 灿若星晨 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:44 by 星空星月
信息提示
请填处理意见