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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 真菌菌丝体提取DNA问题
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王之御魂

木虫 (小有名气)

[求助] 真菌菌丝体提取DNA问题

最近在提真菌的DNA准备测序，提了几次DNA纯度可以，PCR后条带单一，但是送了3次样都测不出结果，想请教前辈们大概选取什么时候的菌丝体来提DNA最好？我在做的这真菌一般第二天摇瓶中就形成很多菌丝体（一般在培养第四、五天收集菌丝体提DNA）
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1楼 2013-10-09 07:59:36
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王之御魂

木虫 (小有名气)
是不是菌丝体长过头了
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2楼2013-10-09 08:00:24
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任_强

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
王之御魂: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-10-09 08:38:28
一般选择菌体生长旺盛的时期，也就是指数生长期。你选四五天的可能有些晚。但你说你纯度可以、PCR条带单一，应该是提出来了。应该不是菌龄的问题吧。你再好好找找其他的原因。
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微生物行业的初学者，望大牛们不吝赐教
3楼2013-10-09 08:18:17
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王之御魂

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 任_强 at 2013-10-09 08:18:17
一般选择菌体生长旺盛的时期，也就是指数生长期。你选四五天的可能有些晚。但你说你纯度可以、PCR条带单一，应该是提出来了。应该不是菌龄的问题吧。你再好好找找其他的原因。

我看了下过滤收集菌丝体用的纱布和冲洗的蒸馏水都要无菌处理，这些影响大吗？
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4楼2013-10-09 08:39:45
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任_强

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
王之御魂: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-10-14 09:17:08
做实验就要按照实验要求去做，不然你不知道哪一步出错。我提真菌RNA的时候取出来的菌体进行过滤和洗涤时也没考虑杂菌的污染问题。不过现在想起来，觉得这个问题挺严重的。如果在提出的菌体中混有杂菌，你不就相当于把杂菌的DNA也提出来了吗？
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微生物行业的初学者，望大牛们不吝赐教
5楼2013-10-09 09:55:44
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王之御魂

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 任_强 at 2013-10-09 09:55:44
做实验就要按照实验要求去做，不然你不知道哪一步出错。我提真菌RNA的时候取出来的菌体进行过滤和洗涤时也没考虑杂菌的污染问题。不过现在想起来，觉得这个问题挺严重的。如果在提出的菌体中混有杂菌，你不就相当于 ...

请教下液氮研磨一般要磨多少分钟，我感觉磨的久点提出来DNA的纯度就会高点
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6楼2013-10-09 10:28:27
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phoenix211

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
王之御魂: 金币+1, ★有帮助 2013-10-10 08:57:54
以前提过木霉的DNA 没有用液氮研磨  用了玻璃珠  效果挺好的  
既然PCR都做出来了  测序没结果  是不是扩增产物不纯？
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7楼2013-10-09 16:03:20
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任_强

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 王之御魂 at 2013-10-09 10:28:27
请教下液氮研磨一般要磨多少分钟，我感觉磨的久点提出来DNA的纯度就会高点...

具体时间不好说，一般把菌磨碎了就可以。液氮低温瞬间冷冻菌体后，再碾压成粉末。
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微生物行业的初学者，望大牛们不吝赐教
8楼2013-10-09 18:33:54
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张小逸

铜虫 (小有名气)
请问提菌丝DNA可以用什么类型的试剂盒？
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9楼2013-10-25 10:55:15
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王之御魂

木虫 (小有名气)
我用上海生工的Ezup柱式真菌基因DNA组抽提试剂盒，效果还行
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10楼2013-10-28 10:10:14
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