24小时热门版块排行榜    

查看: 3082  |  回复: 10

王之御魂

木虫 (小有名气)

[求助] 真菌菌丝体提取DNA问题

最近在提真菌的DNA准备测序,提了几次DNA纯度可以,PCR后条带单一,但是送了3次样都测不出结果,想请教前辈们大概选取什么时候的菌丝体来提DNA最好?我在做的这真菌一般第二天摇瓶中就形成很多菌丝体(一般在培养第四、五天收集菌丝体提DNA)
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王之御魂

木虫 (小有名气)

是不是菌丝体长过头了
2楼2013-10-09 08:00:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

任_强

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
王之御魂: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-10-09 08:38:28
一般选择菌体生长旺盛的时期,也就是指数生长期。你选四五天的可能有些晚。但你说你纯度可以、PCR条带单一,应该是提出来了。应该不是菌龄的问题吧。你再好好找找其他的原因。
微生物行业的初学者,望大牛们不吝赐教
3楼2013-10-09 08:18:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王之御魂

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 任_强 at 2013-10-09 08:18:17
一般选择菌体生长旺盛的时期,也就是指数生长期。你选四五天的可能有些晚。但你说你纯度可以、PCR条带单一,应该是提出来了。应该不是菌龄的问题吧。你再好好找找其他的原因。

我看了下过滤收集菌丝体用的纱布和冲洗的蒸馏水都要无菌处理,这些影响大吗?
4楼2013-10-09 08:39:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

任_强

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
王之御魂: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-10-14 09:17:08
做实验就要按照实验要求去做,不然你不知道哪一步出错。我提真菌RNA的时候取出来的菌体进行过滤和洗涤时也没考虑杂菌的污染问题。不过现在想起来,觉得这个问题挺严重的。如果在提出的菌体中混有杂菌,你不就相当于把杂菌的DNA也提出来了吗?
微生物行业的初学者,望大牛们不吝赐教
5楼2013-10-09 09:55:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王之御魂

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 任_强 at 2013-10-09 09:55:44
做实验就要按照实验要求去做,不然你不知道哪一步出错。我提真菌RNA的时候取出来的菌体进行过滤和洗涤时也没考虑杂菌的污染问题。不过现在想起来,觉得这个问题挺严重的。如果在提出的菌体中混有杂菌,你不就相当于 ...

请教下液氮研磨一般要磨多少分钟,我感觉磨的久点提出来DNA的纯度就会高点
6楼2013-10-09 10:28:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

phoenix211

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
王之御魂: 金币+1, 有帮助 2013-10-10 08:57:54
以前提过木霉的DNA 没有用液氮研磨  用了玻璃珠  效果挺好的  
既然PCR都做出来了  测序没结果  是不是扩增产物不纯?
7楼2013-10-09 16:03:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

任_强

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 王之御魂 at 2013-10-09 10:28:27
请教下液氮研磨一般要磨多少分钟,我感觉磨的久点提出来DNA的纯度就会高点...

具体时间不好说,一般把菌磨碎了就可以。液氮低温瞬间冷冻菌体后,再碾压成粉末。
微生物行业的初学者,望大牛们不吝赐教
8楼2013-10-09 18:33:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张小逸

铜虫 (小有名气)

请问提菌丝DNA可以用什么类型的试剂盒?
9楼2013-10-25 10:55:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王之御魂

木虫 (小有名气)

我用上海生工的Ezup柱式真菌基因DNA组抽提试剂盒,效果还行
10楼2013-10-28 10:10:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 王之御魂 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +37 医学老男孩 2026-08-13 86/4300 2026-08-18 00:18 by longsantaizi
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +4 基诺咪客 2026-08-17 4/200 2026-08-17 16:10 by Vivilian
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
信息提示
请填处理意见