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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 真菌提取DNA时是要求菌丝还是孢子？
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zy1126

铁虫 (小有名气)

[交流] 真菌提取DNA时是要求菌丝还是孢子？

我最近提取的几个样的DNA，刚提来时电泳液能检测到，但是隔了一两天做PCR怎么也做不出来？这是DNA死了吗，这几个样，我是放的时间稍微长一些~
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1楼 2013-01-30 15:20:34
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yuxiangrousi

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
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rainwander: 金币+2, 鼓励交流 2013-02-14 21:07:48
用菌丝就可以了  在玻璃纸平皿上可以很方便的手机菌丝 另外DNA不存在什么死不死的问题 可能是你反复冻融讲解掉了 也可能是引物的问题 不过按理说只要DNA提的问题不大 都是很容易扩出目标条带的（在反应体系没有问题的情况下）
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11楼2013-02-01 21:43:26
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sofiali

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
菌丝和孢子都可以，新鲜的菌丝要好些，我曾经有一段时间，用菌丝能提出来，并且量很大，但是用菌丝和孢子的混合物提，DNA质量就不好，不过PCR还是没问题的
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15楼2013-02-28 20:36:40
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棒哈哈

铁虫 (小有名气)
★
zy1126(金币+1): 谢谢参与
我以前做用的是菌丝。DNA是不会那么快降解的。PCR 不出结果有多种原因，如果是 DNA 浓度过大，那就稀释一下再用！祝好运
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2楼2013-01-30 16:37:08
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yabing0324

金虫 (职业作家)
★
zy1126(金币+1): 谢谢参与
菌丝孢子都可以

P不出来原因太多了，看看体系配错没，酶有没有失活，引物常用的话放4度就好了，没必要反复冻融
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4楼2013-01-30 21:56:21
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swaucq

金虫 (正式写手)
★
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菌丝相对来说要好提些，菌株生长时间不要太长。
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8楼2013-01-31 20:21:04
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zy1126

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 棒哈哈 at 2013-01-30 16:37:08
我以前做用的是菌丝。DNA是不会那么快降解的。PCR 不出结果有多种原因，如果是 DNA 浓度过大，那就稀释一下再用！祝好运

我就是纳闷啊~我的以前三个样保存的好好的，没有什么问题，就这批的样这种结果，提DNA完了，我都是溶解在30ul的TE里，浓度大也改跑的出啊，不该连条带都没有啊
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3楼2013-01-30 16:57:16
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月雨风扬

金虫 (正式写手)
★
zy1126(金币+1): 谢谢参与
菌丝
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5楼2013-01-31 08:32:54
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zff912

金虫 (小有名气)
★
zy1126(金币+1): 谢谢参与
同意楼上  菌丝
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6楼2013-01-31 11:46:04
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dasheng5241

铁虫 (小有名气)
★
zy1126(金币+1): 谢谢参与
孢子 谢谢
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7楼2013-01-31 15:15:38
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DAISY-000

铜虫 (小有名气)
★
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都可以，都提过，看你是什么真菌了
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9楼2013-02-01 09:24:44
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hfwang111222

新虫 (初入文坛)
菌丝
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10楼2013-02-01 14:19:49
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rightodom

新虫 (初入文坛)
菌丝
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12楼2013-02-03 02:37:45
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zy1126

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by yuxiangrousi at 2013-02-01 21:43:26
用菌丝就可以了  在玻璃纸平皿上可以很方便的手机菌丝 另外DNA不存在什么死不死的问题 可能是你反复冻融讲解掉了 也可能是引物的问题 不过按理说只要DNA提的问题不大 都是很容易扩出目标条带的（在反应体系没有问题 ...

一快的证对照没有问题，说明体系和引物都没有问题，其他几个样我反复动容了好几次，这几个就冻融了两次，就成这样了，我甚是不理解啊
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13楼2013-02-14 20:29:10
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yuxiangrousi

铜虫 (初入文坛)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
13楼: Originally posted by zy1126 at 2013-02-14 20:29:10
一快的证对照没有问题，说明体系和引物都没有问题，其他几个样我反复动容了好几次，这几个就冻融了两次，就成这样了，我甚是不理解啊...

那估计是提的问题 可能盐离子没去干净拉 蛋白残留拉 各种原因 你再提一次试试｀｀｀
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14楼2013-02-15 22:01:11
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warden2012

新虫 (初入文坛)
★
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都可以啊，不是这个原因，可能是PCR的问题
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16楼2013-03-02 21:25:21
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m6633

新虫 (初入文坛)
★
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看你使用什么方法提取的Dna  一般DNA不太容易降解   P不出来就得看你的体系了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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17楼2013-03-04 09:01:22
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我是屌丝yes

新虫 (初入文坛)
★
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看你的需要。一般提DNA我们用CTAB-SDS 的方法时都是用的真菌菌丝
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18楼2013-05-06 18:21:24
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Hliotrope

木虫 (著名写手)
★
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我去，DNA还死了，会不会是变性了，DNA应该不会那么快就降解了
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19楼2013-05-07 22:49:59
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zrj0710

新虫 (初入文坛)
★
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我还是用传统的PD摇菌提取呢，有可能是你用的试剂盒，提取效果不好或者DNA碎片溶解的快
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20楼2013-05-21 21:45:51
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