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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 无孢子真菌的保存方法
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tmhua

铁虫 (小有名气)

[求助] 无孢子真菌的保存方法

本人最近分离到一些无孢子真菌，需要保存。但不知道哪种保存方法较为合适。以前用甘油保存，结果半年后发现有些转出来活化不出来了。
求有做这方面的大虾能帮帮我。
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1楼2011-07-04 16:18:25
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beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2, EPI+1): 鼓励应助 2011-07-04 19:47:32
引用回帖:
Originally posted by vakeyzhang at 2011-07-04 17:30:08:
你好，我是新虫，我想请问用哪种固体培养基那？PDA？还是~

可以用葡萄糖种子斜面培养基
种子斜面培养基： 葡萄糖 20g 蛋白胨 2.0g 酵母膏 3.0g  硫酸铵 5.0g  琼脂粉 20g pH 自然

5ml左右培养基倒在试管里，倾斜试管做成一个斜面。就是倒好培养基后，试管口用东西垫一下，形成一个倾斜度，等培养基凝固了就可以。
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5楼2011-07-04 18:24:15
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
促孢培养基的配方是
KH2PO4 1 g , KNO3 1 g ,MgSO4·7H2O 0.5 g ,KCl 0.5 g ,淀粉 0.2 g ,葡萄糖 0.2 g ,蔗糖 0.2 g ,琼脂 15 g ,水1 000 mL。
http://www.zlunwen.com/pharmacological/clinicalmedicine/61833.htm

碳源和氮源都很少，有机物和无机物也很少，渗透压很小，长不好的，产孢效果值得怀疑。碳源淀粉葡萄糖蔗糖加起来才0.06%，远小于我用的2%，要是我是真菌，我就干脆绝食（这么点吃的还要我产仔，我又不能光能自养）。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
8楼2011-07-05 17:49:46
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普通回帖

tmhua

铁虫 (小有名气)
求各位了
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2楼2011-07-04 16:19:06
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beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励应助 2011-07-04 19:47:19
这个要用固体种子培养基保存吧，在试管中加入约5ml的培养基制成斜面培养基，然后将真菌划线（S型划线），培养好后再用封口膜封紧，放在-80度保存，-20度大概也行，不过最好2-3个月再以同样方式接种一次，否则就像你说的一样了活化不出来了~
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3楼2011-07-04 16:32:40
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vakeyzhang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by beautybanana at 2011-07-04 16:32:40:
这个要用固体种子培养基保存吧，在试管中加入约5ml的培养基制成斜面培养基，然后将真菌划线（S型划线），培养好后再用封口膜封紧，放在-80度保存，-20度大概也行，不过最好2-3个月再以同样方式接种一次，否则就像 ...

你好，我是新虫，我想请问用哪种固体培养基那？PDA？还是~
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4楼2011-07-04 17:30:08
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
rainwander(金币+5, EPI+1): 回答的总是那么的详细，赞一个 2011-07-04 22:11:10
tmhua(金币+1): 是啊 孢子抗逆性好，我想弄出孢子来用甘油管或是牛奶管保存，可惜孢子出不来。用促孢培养基都没有出来 2011-07-05 09:49:58
tmhua(金币+4): 2011-08-02 11:04:06
假如将真菌在斜面培养基上接种，等其生长起来之后，整枝试管放进去-80度，那么真菌的生命活动进入休眠，细胞内部的水结晶形成冰晶，在再拿出来到常温下的时候，冰晶复融，这个过程可能会对细胞器造成机械损伤，使真菌细胞生命力下降。所以在低温保存时需要加入甘油或者其它物质做保护剂。

这个回帖令我想起石蜡保存法，就是让真菌生长起来之后加入液体石蜡覆盖菌落，然后常温或者低温保存，我没这样做过，也不知道效果如何，但是这个方法在微生物实验技术之类的书上有相关介绍。

我现在用的是低温保存，用20%甘油作为保护剂，我比楼主幸运，我的菌丝是液体发酵摇瓶里得到的，那时候还没有孢子，而半年后用平板来活化还是长得很好。不知道是不是楼主的甘油浓度出问题，还是某些真菌真的不适合这样保存。

照理说孢子的抗逆性比菌丝强，如果有孢子，保存效果会好一些，我也试过有一株真菌在平板上长好之后放在4度半年之后接种不活的，当时后悔没有早用甘油保存。真菌在不同的培养基上生长状况会不同，换培养基可能会产孢子，就我的经验来说，PDA含有大量葡萄糖，很利于真菌生长，所以菌丝发达孢子稀疏，但如果换了一种培养基，情况可能会不同。我曾经用几种培养基来培养一株真菌，用来获取大量孢子，结果PDA是效果最差的，不知道楼主有没有试过换培养基。
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6楼2011-07-04 19:55:55
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
Originally posted by beautybanana at 2011-07-04 18:24:15:
可以用葡萄糖种子斜面培养基
种子斜面培养基： 葡萄糖 20g 蛋白胨 2.0g 酵母膏 3.0g  硫酸铵 5.0g  琼脂粉 20g pH 自然

5ml左右培养基倒在试管里，倾斜试管做成一个斜面。就是倒好培养基后，试管口用东西 ...

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3163471&fpage=1
有空可以看看这张帖
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7楼2011-07-04 19:59:52
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
促孢培养基的配方是
KH2PO4 1 g , KNO3 1 g ,MgSO4·7H2O 0.5 g ,KCl 0.5 g ,淀粉 0.2 g ,葡萄糖 0.2 g ,蔗糖 0.2 g ,琼脂 15 g ,水1 000 mL。
http://www.zlunwen.com/pharmacological/clinicalmedicine/61833.htm

碳源和氮源都很少，有机物和无机物也很少，渗透压很小，长不好的，产孢效果值得怀疑。碳源淀粉葡萄糖蔗糖加起来才0.06%，远小于我用的2%，要是我是真菌，我就干脆绝食（这么点吃的还要我产仔，我又不能光能自养）。开玩笑而已，不过既然这个培养基不能促进产孢，那还可以换用别的培养基，我曾经摸索过一个真菌产孢子的培养基，一共试了PDA、PY、PY+TB、PY+麦麸、PDA+麦麸、麦麸，结果是菌丝发达程度从大到小为麦麸、PY+麦麸、PDA+麦麸、PDA、PY、PY+TB，但是产孢子能力从大到小为PY+麦麸、PY、PY+TB、麦麸、PDA+麦麸、PDA，我希望菌丝不要太发达，孢子多就行，所以效果由好到坏排序为PY、PY+TB、PY+麦麸、麦麸、PDA+麦麸、PDA。所以如果是不产孢子，可以先换几种培养基，有可能就产了，促孢培养基不一定好，不一定说促孢就真能促孢，微生物很神奇的，不一定以为适合就真能适合。
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9楼2011-07-05 18:07:59
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huangdi5217

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-05 18:07:59:
促孢培养基的配方是
KH2PO4 1 g , KNO3 1 g ,MgSO4·7H2O 0.5 g ,KCl 0.5 g ,淀粉 0.2 g ,葡萄糖 0.2 g ,蔗糖 0.2 g ,琼脂 15 g ,水1 000 mL。
[url]http://www.zlunwen.com/pharmacological/clinicalmedicine/ ...

麻烦问一下，培养基的具体成分是什么？我不太了解麦麸，PY，TB等具体配方
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10楼2011-07-19 19:33:24
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