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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 【求助/交流】各位做霉菌的虫友有没有观察孢子萌发的好方法
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xiaoruoqiu

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】各位做霉菌的虫友有没有观察孢子萌发的好方法

如题，本虫想观察所养的一株霉菌无性孢子的萌发过程，苦于没有较好的方法。请问各位虫友有没有做过这个东东，用什么方法比较好呢？
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1楼 2011-03-22 19:26:45
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wingaboy

金虫 (小有名气)
★
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有没有人试过摇瓶培养观察孢子萌发的？
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6楼2011-10-08 12:09:01
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普通回帖

yyw30000

铜虫 (小有名气)
把孢子滴在颜色浅的营养液中，再取少许滴于载波片上，盖上盖玻片，合适的温度培养，中间取出来在显微镜下10倍观察，如水分丧失，及时补充。
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2楼2011-03-23 17:27:05
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xiaoruoqiu

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yyw30000 at 2011-03-23 17:27:05:
把孢子滴在颜色浅的营养液中，再取少许滴于载波片上，盖上盖玻片，合适的温度培养，中间取出来在显微镜下10倍观察，如水分丧失，及时补充。

这个，营养液加不加琼脂呢，加的话加多少合适？
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3楼2011-03-23 17:32:42
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yyw30000

铜虫 (小有名气)
xiaoruoqiu(金币+5): 2011-03-28 11:38:33
不加琼脂
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4楼2011-03-23 17:39:48
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yyw30000

铜虫 (小有名气)
xiaoruoqiu(金币+5): 好吧，应当给的。要是没其他人回复就全送你 2011-03-23 21:24:35
在液体状态下观察，这个方法不一定成功，但是不妨试一下。
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5楼2011-03-23 17:40:40
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plumplumgxc

金虫 (正式写手)
★ ★
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zhang8826857(金币+1): 鼓励回帖交流^_^ 2011-10-13 11:36:37
凹玻片，加无菌水（营养液可以不加），加点孢子 进去。盖盖玻片，注意水要少，让盖片与水之间留点空隙。放培养皿里培养，皿里放浸湿的滤纸，玻片下面垫高，别沾到湿滤纸。该上皿盖。培养，定期取出玻片直接显微观察。要是以上还是不懂，参考微生物试验中的小室培养。
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7楼2011-10-10 16:09:30
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sdmissing

铁虫 (小有名气)
★
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我们做链霉菌是用的DGM培养基培养孢子悬液，测OD，可以参考一下
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8楼2011-11-22 21:28:26
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xiaoruoqiu

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by sdmissing at 2011-11-22 21:28:26:
我们做链霉菌是用的DGM培养基培养孢子悬液，测OD，可以参考一下

好办法，严重崇拜
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9楼2011-11-23 16:25:41
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sagast

铁虫 (小有名气)
★
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7.3.霉菌染色法7.3.1.Mallory氏染色法[固   定]
10%甲醛水溶液或酒精溶液。
[试   剂]
明矾苏木精溶液
2.5%焰红或5%伊红水溶液Stirling氏结晶紫溶液：   
结晶紫           5g
纯酒精          10ml
苯胺            2ml
蒸馏水          88ml
革兰氏碘溶液：           
碘                1g
碘化钾            2g
蒸馏水         300ml
苯胺分化液
[操作步骤]
1．石蜡切片脱蜡至水。
2．明矾苏木精染3~5分钟，
3．水洗。
4．2.5%焰红或5%伊红水溶液于56℃染15分钟。
5．水洗。
6．Stirling氏结晶紫溶液5~10分钟。
7．水洗。
8．革兰氏碘溶液1分钟。
9．水洗后以滤纸吸干。
10．苯胺溶液分化数次，至无色脱下为止。
11．二甲苯洗3~4次，树胶封固。
[结   果]
菌丝呈蓝色，芽孢呈红色。



7.3.2.Gridley氏染色法(1953)
[固   定]
10%甲醛水溶液，石蜡切片6微米。
[试   剂]
4%铬酸水溶液Schiff氏试剂：   
碱性品红               0.5g
偏亚硫酸钠               2g
1mol/L盐酸             20ml
活性碳                   3g
蒸馏水                100ml
配制：蒸馏水煮沸后加入碱性品红，待冷至60℃时过滤，加偏亚硫酸钠及盐酸,置普通室温暗处放18~24小时，加活性碳摇荡1分钟，过滤于0~5℃冰箱内。
0.5%偏亚硫酸钠-盐酸溶液：
偏亚硫酸钠.    0. 5g
0.05mol/L盐酸100ml
Gomori氏醛复红溶液：  
碱性品红           0.5g
70%酒精溶液      100ml
盐酸                1ml
多聚乙醛            1ml
配制：先配制盐酸酒精溶液，再加碱性品红及多聚乙醛，24小时后变为紫色即贮于冰箱内。
95%酒精溶液酸性间黄溶液：  
酸性间黄                 0.25g
0.25%醋酸水溶液         100ml
[操作步骤]
1．石蜡切片脱蜡至蒸馏水。
2．4%铬酸氧化1小时。
3．流水冲洗5分钟。
4．浸入Schiff氏试剂15分钟。
5．0.5%偏亚硫酸钠-盐酸溶液换洗3次约2分钟。            
6．水洗15分钟。
7．Gomori氏醛复红溶液15~20分钟。
8．95%酒精溶液洗，再水洗5分钟。
9．酸性间黄溶液染2~5分钟，水洗。
10．常规脱水，透明，封固。
[结   果]
菌丝呈深蓝色，孢子呈玫瑰色或紫红色，酵母菌包膜呈深紫红色，弹力纤维及粘液呈深蓝色，背景为黄色。



7.3.3.Grocott氏六铵银染色法(1955)
[固   定]
10%甲醛水溶液或Helly氏液。
[试   剂]
5%铬酸水溶液1%亚硫酸钠水溶液六铵银溶液：  
3%六次甲基四胺水溶液       100ml
5%硝酸银水溶液              5ml
（ 两液混合时呈现乳白色，瞬间透明）
六铵银染色液：
六铵银溶液                 25ml
5%硼砂（四硼酸钠）水溶液    2ml
蒸馏水                     25ml.
0.2%氯化金水溶液2%硫代硫酸钠水溶液核固红染液：
核固红                       0.1g
硫酸铝                        5g
蒸馏水                     100ml
（将硫酸铝溶于蒸馏水，加入核固红煮沸冷却，过滤室温保存）
淡绿染色液:   
淡绿Y                       0.2g
蒸馏水                      100ml
冰醋酸                      0.2ml
[操作步骤]
1．石蜡切片脱蜡至水。
2．5%铬酸水溶液氧化60分钟。
3．流水洗涤5分钟。
4．1%亚硫酸钠水溶液1分钟除去铬酸。
5．自来水洗涤5分钟，蒸馏水洗三次。
6．置六铵银染液于45~50℃温箱内60分钟，切片呈浅棕色为止。
7．蒸馏水洗3~4次。
8．0.2%氯化金水溶液调色5分钟。
9．蒸馏水洗涤。
10．2%硫代硫酸钠水溶液固定3分钟。
11．自来水洗涤。
12．入核固红染液染细胞核10分钟。
13．自来水洗涤，蒸馏水洗涤。
14．入淡绿染液（1/10稀释）复染30秒钟，水洗。
15．常规脱水，透明，封固。
[结   果]
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10楼2011-11-23 17:11:36
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yupeibin

禁虫 (正式写手)
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11楼2011-11-23 18:17:43
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