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[交流]
【求助/交流】各位做霉菌的虫友有没有观察孢子萌发的好方法
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| 如题，本虫想观察所养的一株霉菌无性孢子的萌发过程，苦于没有较好的方法。请问各位虫友有没有做过这个东东，用什么方法比较好呢？ |
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好办法，严重崇拜 9楼2011-11-23 16:25:41
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7.3.霉菌染色法7.3.1.Mallory氏染色法[固 定] 10%甲醛水溶液或酒精溶液。 [试 剂] 明矾苏木精溶液 2.5%焰红或5%伊红水溶液Stirling氏结晶紫溶液： 结晶紫 5g 纯酒精 10ml 苯胺 2ml 蒸馏水 88ml 革兰氏碘溶液： 碘 1g 碘化钾 2g 蒸馏水 300ml 苯胺分化液 [操作步骤] 1．石蜡切片脱蜡至水。 2．明矾苏木精染3~5分钟， 3．水洗。 4．2.5%焰红或5%伊红水溶液于56℃染15分钟。 5．水洗。 6．Stirling氏结晶紫溶液5~10分钟。 7．水洗。 8．革兰氏碘溶液1分钟。 9．水洗后以滤纸吸干。 10．苯胺溶液分化数次，至无色脱下为止。 11．二甲苯洗3~4次，树胶封固。 [结 果] 菌丝呈蓝色，芽孢呈红色。 7.3.2.Gridley氏染色法(1953) [固 定] 10%甲醛水溶液，石蜡切片6微米。 [试 剂] 4%铬酸水溶液Schiff氏试剂： 碱性品红 0.5g 偏亚硫酸钠 2g 1mol/L盐酸 20ml 活性碳 3g 蒸馏水 100ml 配制：蒸馏水煮沸后加入碱性品红，待冷至60℃时过滤，加偏亚硫酸钠及盐酸,置普通室温暗处放18~24小时，加活性碳摇荡1分钟，过滤于0~5℃冰箱内。 0.5%偏亚硫酸钠-盐酸溶液： 偏亚硫酸钠. 0. 5g 0.05mol/L盐酸100ml Gomori氏醛复红溶液： 碱性品红 0.5g 70%酒精溶液 100ml 盐酸 1ml 多聚乙醛 1ml 配制：先配制盐酸酒精溶液，再加碱性品红及多聚乙醛，24小时后变为紫色即贮于冰箱内。 95%酒精溶液酸性间黄溶液： 酸性间黄 0.25g 0.25%醋酸水溶液 100ml [操作步骤] 1．石蜡切片脱蜡至蒸馏水。 2．4%铬酸氧化1小时。 3．流水冲洗5分钟。 4．浸入Schiff氏试剂15分钟。 5．0.5%偏亚硫酸钠-盐酸溶液换洗3次约2分钟。 6．水洗15分钟。 7．Gomori氏醛复红溶液15~20分钟。 8．95%酒精溶液洗，再水洗5分钟。 9．酸性间黄溶液染2~5分钟，水洗。 10．常规脱水，透明，封固。 [结 果] 菌丝呈深蓝色，孢子呈玫瑰色或紫红色，酵母菌包膜呈深紫红色，弹力纤维及粘液呈深蓝色，背景为黄色。 7.3.3.Grocott氏六铵银染色法(1955) [固 定] 10%甲醛水溶液或Helly氏液。 [试 剂] 5%铬酸水溶液1%亚硫酸钠水溶液六铵银溶液： 3%六次甲基四胺水溶液 100ml 5%硝酸银水溶液 5ml （ 两液混合时呈现乳白色，瞬间透明） 六铵银染色液： 六铵银溶液 25ml 5%硼砂（四硼酸钠）水溶液 2ml 蒸馏水 25ml. 0.2%氯化金水溶液2%硫代硫酸钠水溶液核固红染液： 核固红 0.1g 硫酸铝 5g 蒸馏水 100ml （将硫酸铝溶于蒸馏水，加入核固红煮沸冷却，过滤室温保存） 淡绿染色液: 淡绿Y 0.2g 蒸馏水 100ml 冰醋酸 0.2ml [操作步骤] 1．石蜡切片脱蜡至水。 2．5%铬酸水溶液氧化60分钟。 3．流水洗涤5分钟。 4．1%亚硫酸钠水溶液1分钟除去铬酸。 5．自来水洗涤5分钟，蒸馏水洗三次。 6．置六铵银染液于45~50℃温箱内60分钟，切片呈浅棕色为止。 7．蒸馏水洗3~4次。 8．0.2%氯化金水溶液调色5分钟。 9．蒸馏水洗涤。 10．2%硫代硫酸钠水溶液固定3分钟。 11．自来水洗涤。 12．入核固红染液染细胞核10分钟。 13．自来水洗涤，蒸馏水洗涤。 14．入淡绿染液（1/10稀释）复染30秒钟，水洗。 15．常规脱水，透明，封固。 [结 果] |
10楼2011-11-23 17:11:36
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11楼2011-11-23 18:17:43
