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xiaoruoqiu

铜虫 (正式写手)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 979092

[交流] 【求助/交流】各位做霉菌的虫友有没有观察孢子萌发的好方法

如题，本虫想观察所养的一株霉菌无性孢子的萌发过程，苦于没有较好的方法。请问各位虫友有没有做过这个东东，用什么方法比较好呢？

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1楼 2011-03-22 19:26:45

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sagast

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2.5
帖子: 216
在线: 10.4小时
虫号: 153492

★
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7.3.霉菌染色法7.3.1.Mallory氏染色法[固定]
10%甲醛水溶液或酒精溶液。
[试剂]
明矾苏木精溶液
2.5%焰红或5%伊红水溶液Stirling氏结晶紫溶液：
结晶紫          5g
纯酒精       10ml
苯胺          2ml
蒸馏水       88ml
革兰氏碘溶液：
碘             1g
碘化钾          2g
蒸馏水       300ml
苯胺分化液
[操作步骤]
1．石蜡切片脱蜡至水。
2．明矾苏木精染3~5分钟，
3．水洗。
4．2.5%焰红或5%伊红水溶液于56℃染15分钟。
5．水洗。
6．Stirling氏结晶紫溶液5~10分钟。
7．水洗。
8．革兰氏碘溶液1分钟。
9．水洗后以滤纸吸干。
10．苯胺溶液分化数次，至无色脱下为止。
11．二甲苯洗3~4次，树胶封固。
[结果]
菌丝呈蓝色，芽孢呈红色。

7.3.2.Gridley氏染色法(1953)
[固定]
10%甲醛水溶液，石蜡切片6微米。
[试剂]
4%铬酸水溶液Schiff氏试剂：
碱性品红             0.5g
偏亚硫酸钠             2g
1mol/L盐酸          20ml
活性碳                3g
蒸馏水             100ml
配制：蒸馏水煮沸后加入碱性品红，待冷至60℃时过滤，加偏亚硫酸钠及盐酸,置普通室温暗处放18~24小时，加活性碳摇荡1分钟，过滤于0~5℃冰箱内。
0.5%偏亚硫酸钠-盐酸溶液：
偏亚硫酸钠. 0. 5g
0.05mol/L盐酸100ml
Gomori氏醛复红溶液：
碱性品红          0.5g
70%酒精溶液    100ml
盐酸             1ml
多聚乙醛          1ml
配制：先配制盐酸酒精溶液，再加碱性品红及多聚乙醛，24小时后变为紫色即贮于冰箱内。
95%酒精溶液酸性间黄溶液：
酸性间黄                0.25g
0.25%醋酸水溶液       100ml
[操作步骤]
1．石蜡切片脱蜡至蒸馏水。
2．4%铬酸氧化1小时。
3．流水冲洗5分钟。
4．浸入Schiff氏试剂15分钟。
5．0.5%偏亚硫酸钠-盐酸溶液换洗3次约2分钟。
6．水洗15分钟。
7．Gomori氏醛复红溶液15~20分钟。
8．95%酒精溶液洗，再水洗5分钟。
9．酸性间黄溶液染2~5分钟，水洗。
10．常规脱水，透明，封固。
[结果]
菌丝呈深蓝色，孢子呈玫瑰色或紫红色，酵母菌包膜呈深紫红色，弹力纤维及粘液呈深蓝色，背景为黄色。

7.3.3.Grocott氏六铵银染色法(1955)
[固定]
10%甲醛水溶液或Helly氏液。
[试剂]
5%铬酸水溶液1%亚硫酸钠水溶液六铵银溶液：
3%六次甲基四胺水溶液    100ml
5%硝酸银水溶液             5ml
（两液混合时呈现乳白色，瞬间透明）
六铵银染色液：
六铵银溶液                25ml
5%硼砂（四硼酸钠）水溶液 2ml
蒸馏水                   25ml.
0.2%氯化金水溶液2%硫代硫酸钠水溶液核固红染液：
核固红                      0.1g
硫酸铝                      5g
蒸馏水                   100ml
（将硫酸铝溶于蒸馏水，加入核固红煮沸冷却，过滤室温保存）
淡绿染色液:
淡绿Y                      0.2g
蒸馏水                   100ml
冰醋酸                   0.2ml
[操作步骤]
1．石蜡切片脱蜡至水。
2．5%铬酸水溶液氧化60分钟。
3．流水洗涤5分钟。
4．1%亚硫酸钠水溶液1分钟除去铬酸。
5．自来水洗涤5分钟，蒸馏水洗三次。
6．置六铵银染液于45~50℃温箱内60分钟，切片呈浅棕色为止。
7．蒸馏水洗3~4次。
8．0.2%氯化金水溶液调色5分钟。
9．蒸馏水洗涤。
10．2%硫代硫酸钠水溶液固定3分钟。
11．自来水洗涤。
12．入核固红染液染细胞核10分钟。
13．自来水洗涤，蒸馏水洗涤。
14．入淡绿染液（1/10稀释）复染30秒钟，水洗。
15．常规脱水，透明，封固。
[结果]