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tmhua

铁虫 (小有名气)

[求助] 无孢子真菌的保存方法

本人最近分离到一些无孢子真菌,需要保存。但不知道哪种保存方法较为合适。以前用甘油保存,结果半年后发现有些转出来活化不出来了。
求有做这方面的大虾能帮帮我。
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
rainwander(金币+5, EPI+1): 回答的总是那么的详细,赞一个 2011-07-04 22:11:10
tmhua(金币+1): 是啊 孢子抗逆性好,我想弄出孢子来用甘油管或是牛奶管保存,可惜孢子出不来。用促孢培养基都没有出来 2011-07-05 09:49:58
tmhua(金币+4): 2011-08-02 11:04:06
假如将真菌在斜面培养基上接种,等其生长起来之后,整枝试管放进去-80度,那么真菌的生命活动进入休眠,细胞内部的水结晶形成冰晶,在再拿出来到常温下的时候,冰晶复融,这个过程可能会对细胞器造成机械损伤,使真菌细胞生命力下降。所以在低温保存时需要加入甘油或者其它物质做保护剂。

这个回帖令我想起石蜡保存法,就是让真菌生长起来之后加入液体石蜡覆盖菌落,然后常温或者低温保存,我没这样做过,也不知道效果如何,但是这个方法在微生物实验技术之类的书上有相关介绍。

我现在用的是低温保存,用20%甘油作为保护剂,我比楼主幸运,我的菌丝是液体发酵摇瓶里得到的,那时候还没有孢子,而半年后用平板来活化还是长得很好。不知道是不是楼主的甘油浓度出问题,还是某些真菌真的不适合这样保存。

照理说孢子的抗逆性比菌丝强,如果有孢子,保存效果会好一些,我也试过有一株真菌在平板上长好之后放在4度半年之后接种不活的,当时后悔没有早用甘油保存。真菌在不同的培养基上生长状况会不同,换培养基可能会产孢子,就我的经验来说,PDA含有大量葡萄糖,很利于真菌生长,所以菌丝发达孢子稀疏,但如果换了一种培养基,情况可能会不同。我曾经用几种培养基来培养一株真菌,用来获取大量孢子,结果PDA是效果最差的,不知道楼主有没有试过换培养基。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2011-07-04 19:55:55
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beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励应助 2011-07-04 19:47:19
这个要用固体种子培养基保存吧,在试管中加入约5ml的培养基制成斜面培养基,然后将真菌划线(S型划线),培养好后再用封口膜封紧,放在-80度保存,-20度大概也行,不过最好2-3个月再以同样方式接种一次,否则就像你说的一样了活化不出来了~
3楼2011-07-04 16:32:40
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vakeyzhang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by beautybanana at 2011-07-04 16:32:40:
这个要用固体种子培养基保存吧,在试管中加入约5ml的培养基制成斜面培养基,然后将真菌划线(S型划线),培养好后再用封口膜封紧,放在-80度保存,-20度大概也行,不过最好2-3个月再以同样方式接种一次,否则就像 ...

你好,我是新虫,我想请问用哪种固体培养基那?PDA?还是~
4楼2011-07-04 17:30:08
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beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2, EPI+1): 鼓励应助 2011-07-04 19:47:32
引用回帖:
Originally posted by vakeyzhang at 2011-07-04 17:30:08:
你好,我是新虫,我想请问用哪种固体培养基那?PDA?还是~

可以用葡萄糖种子斜面培养基
种子斜面培养基: 葡萄糖 20g 蛋白胨 2.0g 酵母膏 3.0g  硫酸铵 5.0g  琼脂粉 20g pH 自然

5ml左右培养基倒在试管里,倾斜试管做成一个斜面。就是倒好培养基后,试管口用东西垫一下,形成一个倾斜度,等培养基凝固了就可以。
5楼2011-07-04 18:24:15
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