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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 为什么两次PCR做的结果不一致？
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小鼹鼠

木虫 (小有名气)

[求助] 为什么两次PCR做的结果不一致？ 已有3人参与

筛双交换的，第一遍PCR有条带，第二遍PCR重复，结果就没有条带了。这是什么原因呢？我肯定没加错样。。太坑了……
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天道酬勤
1楼 2015-08-06 20:27:06
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
淡定淡定，正常，二次PCR本身错配就较高，因此总是会出现问题，只能想办法提高扩增的特异性了，可以看看这篇文章（http://www.detaibio.com/topics/pcr-faq-specific-amplify.html）此外注意上样量，二次扩增模板要稀释1000倍左右也很重要，好运喽~
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-08-07 09:43:10
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673643401

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
那就是你的操作有问题，PCR需要很细心，稍微出点错，有可能就P不出来。
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2楼2015-08-07 08:23:14
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小鼹鼠

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-08-07 09:43:10
淡定淡定，正常，二次PCR本身错配就较高，因此总是会出现问题，只能想办法提高扩增的特异性了，可以看看这篇文章（http://www.detaibio.com/topics/pcr-faq-specific-amplify.html）此外注意上样量，二次扩增模板要 ...

不是二次扩增，就是再做第二遍。比如上午做了一锅有条带，下午再做就没条带了。搞不懂是为什么。有的时候是这样，第一次条带很亮，第二次条带就很弱了。
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天道酬勤
4楼2015-08-10 19:25:53
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布za

铜虫 (初入文坛)
我把质粒转到BL21后菌液pcr验证也遇到第一次p有条带，再p一次没有了，并且pcr提质粒用的DH5a也没有条带了，原因到现在都还没弄明白
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5楼2015-08-13 20:51:25
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