应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 为什么两次PCR做的结果不一致？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
101/1返回列表
查看: 5302  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小鼹鼠

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 为什么两次PCR做的结果不一致？ 已有3人参与

筛双交换的，第一遍PCR有条带，第二遍PCR重复，结果就没有条带了。这是什么原因呢？我肯定没加错样。。太坑了……
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
天道酬勤
1楼 2015-08-06 20:27:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

673643401

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
那就是你的操作有问题，PCR需要很细心，稍微出点错，有可能就P不出来。
赞一下 回复此楼
2楼2015-08-07 08:23:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

兑换贵宾

小虫

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
淡定淡定，正常，二次PCR本身错配就较高，因此总是会出现问题，只能想办法提高扩增的特异性了，可以看看这篇文章（http://www.detaibio.com/topics/pcr-faq-specific-amplify.html）此外注意上样量，二次扩增模板要稀释1000倍左右也很重要，好运喽~
赞一下(3人) 回复此楼
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-08-07 09:43:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小鼹鼠

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
3楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-08-07 09:43:10
淡定淡定，正常，二次PCR本身错配就较高，因此总是会出现问题，只能想办法提高扩增的特异性了，可以看看这篇文章（http://www.detaibio.com/topics/pcr-faq-specific-amplify.html）此外注意上样量，二次扩增模板要 ...

不是二次扩增，就是再做第二遍。比如上午做了一锅有条带，下午再做就没条带了。搞不懂是为什么。有的时候是这样，第一次条带很亮，第二次条带就很弱了。
赞一下 回复此楼
天道酬勤
4楼2015-08-10 19:25:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

布za

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
我把质粒转到BL21后菌液pcr验证也遇到第一次p有条带，再p一次没有了，并且pcr提质粒用的DH5a也没有条带了，原因到现在都还没弄明白
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2015-08-13 20:51:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

新一基德

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

操作问题吧，确定两次都完全一样？按理说既然第一次P出来第二次就不该有问题的啊。
赞一下 回复此楼
6楼2015-08-14 09:48:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

管理员

小虫

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小鼹鼠 at 2015-08-10 19:25:53
不是二次扩增，就是再做第二遍。比如上午做了一锅有条带，下午再做就没条带了。搞不懂是为什么。有的时候是这样，第一次条带很亮，第二次条带就很弱了。...

分子生物本身就看不见摸不着啊，存在很大偶然性的，上午做有，下午没有条带，也可能是上午温度低，下午温度又高了呢，或者是加样时间长了一点点，这样温度时间的轻微变化都会引起酶等其他的活性变化啊，当然只是针对普通的Taq酶，如果是热启动酶就不会啦~
赞一下(1人) 回复此楼
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
7楼2015-08-31 16:39:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

DT0221

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
你的PCR体系多少呢？小体系误差比较大，比如10ul、20ul的。特别容易重复不出来。最少体系20ul吧。
另外你的引物特异性好不好？多长？如果和模板重叠了20以上，并且特异性好，应该没问题的。
赞一下 回复此楼
8楼2015-08-31 17:06:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

启从QICONG

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
7楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-08-31 16:39:03
分子生物本身就看不见摸不着啊，存在很大偶然性的，上午做有，下午没有条带，也可能是上午温度低，下午温度又高了呢，或者是加样时间长了一点点，这样温度时间的轻微变化都会引起酶等其他的活性变化啊，当然只是针 ...

配PCR的体系时间的长短对p出来的效果还有影响吗？
赞一下 回复此楼
9楼2015-09-01 09:03:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

兑换贵宾

小虫

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
9楼: Originally posted by 启从QICONG at 2015-09-01 09:03:54
配PCR的体系时间的长短对p出来的效果还有影响吗？...

当然有影响，温度对酶的影响，可能影响不大，但是可以从结果判断啊，你扩增不出来条带，说明就有影响呗，前提是使用试剂什么的全部都没有变。
如果不是热启动酶，普通的酶要在冰上配置反应体系，分子实验，还是注意规范操作，不然难找原因啊~
赞一下 回复此楼
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
10楼2015-09-01 09:34:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小鼹鼠 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 292分，材料与化工，申请调剂 +12 程晴之 2026-04-01 13/650 2026-04-01 17:48 by JYD2011
[考研] 【求调剂】085601材料工程专硕 | 总分272 | +10 脚滑的守法公民 2026-03-27 10/500 2026-04-01 17:23 by pies112
[考研] 085601材料工程找调剂 +18 oatmealR 2026-03-29 19/950 2026-04-01 14:36 by chenqifeng666
[考研] 289求调剂 +19 新时代材料 2026-03-27 21/1050 2026-04-01 14:35 by ZXlzxl0425
[考研] 283求调剂 +9 A child 2026-03-28 9/450 2026-04-01 14:20 by Jaylen.
[考研] 288资源与环境专硕求调剂，不限专业，有学上就行 +25 lllllos 2026-03-30 26/1300 2026-04-01 09:52 by 一只好果子?
[考研] 土木304求调剂 +3 兔突突突， 2026-03-31 3/150 2026-04-01 09:42 by JourneyLucky
[考研] 考研材料工程351分调剂 +5 整个好的 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:36 by topgun2009
[考研] 土木304求调剂 +5 顶级擦擦 2026-03-31 5/250 2026-04-01 08:15 by fdcxdystjk￥
[考研] 329求调剂，一志愿西北工业大学，材料工程（085601） +6 小小机灵虫 2026-03-29 12/600 2026-03-31 16:58 by 记事本2026
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-31 4/200 2026-03-31 10:04 by cal0306
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求调剂 +12 芋泥小铃铛 2026-03-28 12/600 2026-03-30 17:06 by wangjy2002
[考研] 303求调剂 +7 DLkz1314. 2026-03-30 7/350 2026-03-30 16:05 by shuang5186
[考研] 086000生物与医药调剂 +5 Feisty。 2026-03-28 9/450 2026-03-29 12:02 by longlotian
[考研] 305求调剂 +8 RuiFairyrui 2026-03-28 8/400 2026-03-29 08:22 by fmesaito
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +6 崔wj 2026-03-26 6/300 2026-03-29 01:11 by hanserlol
[考研] 356求调剂 +3 gysy?s?a 2026-03-28 3/150 2026-03-29 00:33 by 544594351
[考研] 本科新能源科学与工程，一志愿华理能动285求调剂 +3 AZMK 2026-03-27 5/250 2026-03-28 16:19 by xxxsssccc
[考研] 081200-314 +3 LILIQQ 2026-03-27 4/200 2026-03-28 09:41 by 保护地球你我做�
[考研] 材料求调剂一志愿哈工大324 +7 闫旭东 2026-03-28 9/450 2026-03-28 08:51 by Xu de nuo
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭