应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr 不出目的条带
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 939  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

肉肉-rourou

铁虫 (初入文坛)

[交流] pcr 不出目的条带 已有4人参与

半个月前设计的引物，用DNA跑出条带后，送去测序，与设计的相吻合。可是最近跑PCR，只有质粒出，DNA一个条带都不出，不知道什么原因，是需要改变体系么？怎么改体系呢？新手，谢谢啦！用过两个体系尝试，如下：
反应体系：20                 体系2：20
dNTP  0.5                     dNTP   0.4
Buffer  0.5                    Buffer  2
ddH2O  13.5                 ddH2O  10.4
上游引物  2                   上游引物：1.5
下游引物  2                   下游引物：1.5
DNA  1                          DNA   4

pcr 不出目的条带
untitled.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-07-17 13:58:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

great07225388

新虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-07-17 22:58:08
是以前跑pcr能出结果，现在跑，出不来了吗？如果是，模板可能降解了，建议下次把模板跑个胶看看有没有降解。或者什么东西加错了，或者上下游引物忘了加其中的一个，等等。先排除主观原因，再排除客观原因。祝实验顺利！

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-07-17 17:09:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

没想好名字

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
话说你的酶呢？dntp和buffer各2ul，引物1ul，模板你就要做个梯度试一下了
赞一下 回复此楼
3楼2015-07-19 09:04:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肉肉-rourou

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 没想好名字 at 2015-07-19 09:04:11
话说你的酶呢？dntp和buffer各2ul，引物1ul，模板你就要做个梯度试一下了

酶忘记写了。。。之前跑出来的模板不可以直接用么？
赞一下 回复此楼
4楼2015-07-20 14:05:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肉肉-rourou

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by great07225388 at 2015-07-17 17:09:53
是以前跑pcr能出结果，现在跑，出不来了吗？如果是，模板可能降解了，建议下次把模板跑个胶看看有没有降解。或者什么东西加错了，或者上下游引物忘了加其中的一个，等等。先排除主观原因，再排除客观原因。祝实验顺 ...

是啊，之前有的。排除了东西忘加的问题，东西也都换过新的。模板是最近新提取的，应该没有降解啊。。。
赞一下 回复此楼
5楼2015-07-20 14:08:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

great07225388

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 肉肉-rourou at 2015-07-20 14:08:59
是啊，之前有的。排除了东西忘加的问题，东西也都换过新的。模板是最近新提取的，应该没有降解啊。。。...

这样啊，做个阳性对照试试。祝实验成功哦！

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
6楼2015-07-20 15:04:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

土豆没了

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
最近在做PCR，也遇到过这种情况，但是后面不知道怎么滴它也能出来，换模版换程序换试剂都试过，个人感觉模版放-20是没问题的，没有那么容易降解，还有就是混匀问题，体系最好按照试剂说明书上面的
赞一下 回复此楼
生活因拼搏而精彩，生命因奋斗而高贵
7楼2015-07-27 16:35:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
排除了模板问题，引物也需要验证，此外注意优化体系，摸索退火温度吧，具体操作还是看自己，可以产生热启动PCR酶扩增，高保真taq聚合酶类的热启动形式也可以采用，扩增效果很好
赞一下 回复此楼
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
8楼2015-07-27 17:07:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 肉肉-rourou 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 322求调剂 +5 旧吢 2026-03-24 5/250 2026-03-28 13:26 by Iveryant
[考研] 0703本科郑州大学求调剂 +3 nhj_ 2026-03-25 3/150 2026-03-28 13:24 by Iveryant
[考研] 调剂310 +4 温柔的晚安 2026-03-25 5/250 2026-03-28 13:15 by 唐沐儿
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[考研] 07化学280分求调剂 +10 722865 2026-03-23 10/500 2026-03-27 15:51 by Plutoqq
[考研] 274求调剂 +17 顾九笙要谦虚 2026-03-24 23/1150 2026-03-27 15:16 by caszguilin
[考研] 333求调剂 +3 question挽风 2026-03-23 3/150 2026-03-27 11:29 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +3 刘柯@ 2026-03-24 4/200 2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 一志愿郑大085600，310分求调剂 +5 李潇可 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:14 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿郑州大学，080500学硕，总分317分求调剂 +4 举个栗子oi 2026-03-24 5/250 2026-03-26 23:15 by 不吃魚的貓
[考研] 333求调剂 +6 wfh030413@ 2026-03-23 6/300 2026-03-26 22:45 by 学员8dgXkO
[考研] 271求调剂 +6 生如夏花… 2026-03-22 6/300 2026-03-26 16:48 by 张凯十八号
[考研] 086000生物与医药292求调剂 +6 小小陈小小 2026-03-22 9/450 2026-03-26 15:58 by dick_runner
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭